Name: Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-03T23:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Öğrenin lepidopteran larvalarında baculovirus ağız enfeksiyonu tekniklerini ve insektisidal etkinliği değerlendirmeyi. Damla besleme ve diyet tıpası biyoassay yöntemleri ölümcül dozları belirlemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">Springer Protokolleri</a> ziyaret ediniz insecidical bir ajan ve bu testte kullanılan oral bulaşma tekniklerini gibi mühendislik bakülovirüs hakkında daha fazla bilgi için.

Yazarların beyan edilecek bir çıkar çatışması yoktur.

baculovirus lepidopteran larva ağız enfeksiyon protokolleri

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculoviruses hem protein ekspresyon vektörleri ve böcek haşere kontrol ajanları olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu video lepidopteran larvaları damlacık beslenme ve diyet fiş tabanlı biyoanalizlere ile nasıl polyhedra ile enfekte olabilir gösterir. Bu eşlik eden Springer Protokolleri bölümü bakülovirüs yaşam döngüsü ve kullanımı, böcek öldürücü ajanlar olarak baculoviruses, böcek ilacı gibi baculoviruses kullanmak için artılarını ve eksilerini tartışma da dahil olmak üzere genel bir bakış ve geliştirilmiş böcek etkinlik için baculoviruses genetik geliştirme kaydedilen ilerleme sağlar.

Bu video, böcek etkinliğini belirlemek için bakülovirüs lepidopteran larvaları oral bulaşma tekniklerini göstermektedir.

Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri

Baculovirüsler, hem protein ekspresyon vektörleri hem de böcek zararlısı kontrol ajanları olarak yaygın şekilde kullanılmaktadır. Bu video, lepidopter larva etkileşimlerinin nasıl ...

Baco virüsü, protein ekspresyonu için böcek hücre hatlarıyla birlikte kullanılan yaygın bir DNA vektörüdür. Bununla birlikte, bu virüsün böcekleri ölümcül sonuçlarla etkili bir şekilde enfekte etmesi, onu aynı zamanda etkili bir insektisid ajan haline getirmektedir. Örneğin Brezilya'da, kadife fasulyesi tırtılını kontrol etmek amacıyla her yıl 1 milyondan fazla hektar soya fasulyesi ürününe yabani tip baco virüsü uygulanmaktadır; insektisid etkinliklerini artırmak için baco virüsleri, böceğin hemoselinde aktif olan böceğe özgü toksinleri kodlayan genlerle genetik olarak mühendisliği yapılmıştır.Bu videoda, insektisidal etkinliği analiz etmek amacıyla lepidopter larvae'lerinin bacao virüsü ile oral enfeksiyon yöntemlerini gösteriyoruz. Merhaba, ben Iowa State Üniversitesi Oftalmoloji Bölümü'ndeki Boning laboratuvarından geliyorum. Ben de Boning laboratuvarından Wendy Sparks. Bugün size lepidopter larvae'lerinin VA virüsü enfeksiyonu için iki prosedür göstereceğiz.İlk bölümde, damla besleme biyolojik deneyi kullanarak yeni doğmuş larvaların nasıl enfekte edileceğini göstereceğim. Ardından, diyet kan biyolojik deneyi kullanarak orta ve geç dönem instar larvaların nasıl enfekte edileceğini göstereceğim. Hadi başlayalım.Damlacık besleme biyolojik analizleri, abacavir'in letal dozunun ve balo virüsü enfekte larvaların sağkalım süresinin belirlenmesinde kullanılabilir. Bu analiz için genellikle erken instar veya neonat larvalar kullanılır.Başlamadan önce, uygun diyetleri içeren diyet kaplarının elinizde olduğundan emin olun. Ayrıca, hacimce %4 konsantrasyona ulaşacak şekilde yeşil gıda boyası ekleyerek uygun virüs dilüsyonlarını hazırlayın. Letal viral konsantrasyonu belirlemek için, dilüsyon %1 ile %99 arasında bir mortalite aralığı sağlamalıdır. Uygun virüs konsantrasyonu aralığını belirlemek için ön biyolojik deneyler gerekebilir; polihidraların çökelmesini önlemek için tüpü vortekslendikten sonra, 60 milimetrelik bir Petri kabında virüs çözeltisinden oluşan küçük damlacıklarla iki eş merkezli daire oluşturun.Kullanılan her virüs konsantrasyonu için, negatif kontrol olarak bir yalancı (mock) enfeksiyon düzeneği kurmayı unutmayın. Ardından işlem için, steril bir boya fırçası kullanarak 25 ila 30 neonat larvayı eş merkezli halkaların ortasına aktarın. Larvaların kaçmasını önlemek için kapağı kaba yerleştirin ve paraform ile mühürleyin.Kontaminasyonu önlemek için ideal olarak, her virüs tipi aktarımı için farklı boya fırçaları kullanın. Larvaların beslenmesi için petri kabını oda sıcaklığında 10 ila 15 dakika bekletin. Beslenen larvalar, yeşil gıda boyası transferinden kaynaklanan ön bağırsaktaki yeşil renklenmeden ayırt edilebilir; yalnızca beslenmiş larvaları, her bir kaba bir larva gelecek şekilde, diyet içeren bir onsluk plastik kaplara aktarın.Larvaları aktardıktan sonra, kapları kapaklarla kapatın ve enfeksiyondan 24 saat sonra 28 degrees Celsius sıcaklıkta inkübe edin. Ölü larva içeren tüm kapları ayıklayın. Bu erken ölümler muhtemelen taşıma sırasındaki yaralanmalardan kaynaklanmaktadır.Lethal dozun belirlenmesi için bu biyolojik analiz kullanıldığında, mock enfekte larvalar ve hayatta kalan virüsle işlem görmüş larvalar pupa olana veya pupasyon için toprağa gömülmeye başlayana kadar larvalar her iki ila üç günde bir kontrol edilmelidir. Virüsle enfekte olan larvalar besinin üst kısmında kalacak ve ardından birkaç gün sonra ölecektir. Ölü larvalar bazen büzüşür ve siyaha döner; enfeksiyon nedeniyle ölen larvalar esasen tamamen çözünecek olan poliedra torbalarına dönüşür. Bu aşamada mekanik olarak rahatsız edildiklerinde, her bir işlemdeki larval mortalitesini kaydedin.Öldürücü konsantrasyon biyolojik analizleri, farklı zamanlarda üç veya dört kez tekrarlanmalıdır. Her virüs veya kontrol işlemi için doz başına 30 birey kullanın. LC 50 değerlerini, %95 güven aralıklarını ve uygun istatistikleri hesaplamak için polo veya SAS gibi uygun bir probit analiz programı kullanın.Bu damlacıkla besleme deneyi, ST 50 sağkalım süresi değerlerini belirlemek için de kullanılabilir. Bu durumda, larva mortalitesi daha sık gözlemlerle her dört ila sekiz saatte bir puanlanır. Mortalite oranı yüksekse, sağkalım süresi biyodeneyleri virüsün lc 99 dozu kullanılarak gerçekleştirilir; medyan sağkalım süreleri ve %95 güven sınırları, bir s plus veya SAS programı kullanılarak Kaplan Mayer tahmincisi ile hesaplanır.Harang size damlacık besleme biyolojik analizini gösterdiğine göre, şimdi ben de size diyet tıkaç biyolojik analizini göstereceğim. Diyet tıkaç biyolojik analizinde, letal dozu veya LD 50'yi belirlemek amacıyla, orta ila geç dönem larva evreleri, analizden bir gün önce bilinen dozda virüsle işlenmiş bir diyet tıkaçla beslenir. Larvaları gece boyunca aç bırakmak için diyeti kaptan çıkarın.Bu adım, larvaların virüsü tüketme hızını artıracaktır. Ertesi gün inoküle edilmiş diyet küplerini hazırlamak için diyeti yaklaşık iki kübik milimetrelik küçük küpler halinde kesin. Diyet küpleri çok küçük olursa kururlar.Diyet küpleri çok büyük olursa, larvalar tüm diyet küpünü bir gecede tüketemezler. Şimdi her bir diyet küpüne bir ila iki µL poliedra süspansiyonu ekleyin. Süspansiyon hacimce %4 gıda boyası içermektedir.Süspansiyonun diyet içine nüfuz etmesi için beş ila 15 dakika bekleyin. Negatif kontrol olarak yalancı virüsle işlem görmüş bir diyet küpü hazırlamayı da unutmayın. Ardından, her kaptaki dördüncü instar larvaların her birine birer diyet küpü aktarın.Ardından kapları gece boyunca 28 °C'de inkübatöre yerleştirin; ertesi gün diyet küpünü tamamen tüketmemiş olan larvaları ayıklayın. Daha sonra, kalan larvalar için her kaba büyük bir parça diyet ekleyin. Yalancı enfekte larvalar ve hayatta kalan virüs enfekte larvalar beslenene veya pupa evresine girene kadar, gerektiğinde ek diyet ekleyerek larvaları 28 °C'de tutun.Bu aşamada, ölü ve hayatta kalan böceklerin sayılarını kaydedin. Böcekleri baculovirüs ile enfekte etmek için size iki yöntem göstereceğiz: kanama yoluyla besleme biyopsisi ve diyet plağı biyopsisi. Bu prosedürü gerçekleştirirken, baculovirüs tarafından öldürülmüş larva kadavralarının genellikle hassas olduğunu ve kolayca yırtılarak virüs salabileceğini unutmamak önemlidir.Bu nedenle, kontaminasyonu önlemek için çalışma yüzeylerini sterilize edin ve kontamine olmuş eldivenler ile tek kullanımlık malzemeleri uygun bir şekilde bertaraf edin. Hepsi bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

protocols-for-oral-infection-of-lepidopteran-larvae-with-baculovirus

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, böcek etkinliğini belirlemek için bakülovirüs lepidopteran larvaları enfekte etmek için kullanılan iki microapplicator teknikleri göstermektedir.

Baculovirus lepidopteran Larva Microapplicator destekli Enfeksiyon Protokolleri

Yöntemin hemocoel içine entomopatojenik bakteri doğrudan enjeksiyon kullanır burada...

Ve Yetiştirme ve Enjeksiyon<em&gt; Manduca Sexta</emBakteriyel virülans Değerlendirememesi&gt; Larva

Büyük bal mumu güvesi larvalarının Ağız ve intra haemocolic...

Böcek<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bakteriyel Patogenez İnceleyecek Güçlü Enfeksiyon Model olarak

Bu videoda, büyük balmumu güvesi Galleria mellonella'nın larvalarında bir Mycobacterium bovis enfeksiyon modeli oluşturmak için bir yöntem gösterilmektedir. Mycobacterium bovis BCG'nin bir biyolüminesan suşu, enfeksiyon oluşturmak için larvaların hemolenfine enjekte edilir ve enfeksiyonun ilerlemesini incelemek için biyolüminesans önceden tanımlanmış aralıklarla ölçülür.

Böcek Larvalarında Bakteriyel Enfeksiyon Modeli Oluşturma Tekniği

Akdeniz meyve sineği (medfly) Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae) dünya çapında bir tarım zararlısıdır. Biyolojisinin daha derin bir şekilde anlaşılması, medfly popülasyonlarını kontrol etmenin ve böylece ekonomik etkiyi azaltmanın anahtarıdır. Embriyo mikroenjeksiyonu, bu türde hem germ hattı transformasyonuna hem de ters genetik çalışmalara olanak sağlayan temel bir araçtır.

Dünya Tarım Pest Böcek Embriyo Mikroenjeksiyon yoluyla Nükleik Asitler teslim edilmesi,<em&gt; Ceratitis capitata</em

Yabancı proteinler ifade veya anti-apoptotik etkinliğini potansiyel yabancı proteinler ve onların kesilmiş amino değerlendirmek için kullanılabilir bir ısı şok kaynaklı protein ifade sistemi (pDHsp/V5-O'nun/sf9 hücre), bu iletişim kuralını açıklar asitler böcek hücrelerinde.

Geçici ifade, yabancı genlerin Protein fonksiyonel tahlil için böcek hücrelerindeki (sf9)

Bu protokol için baculovirus baculovirus plazmid geçici transfection Sf9 hücreleri tarafından üretilen ve bir serum serbest süspansiyon kültürde güçlendirilmiş. Süpernatant heparin benzeşme Kromatografi tarafından saf ve ultrasantrifüj tarafından daha da yoğunlaştı. Bu iletişim kuralı üretim ve baculovirus gen terapisi uygulama için arıtma için yararlıdır.

Üretim ve Baculovirus arınma gen tedavisi uygulaması için

Burada, bir aracılı baculovirus böcek hücre ifade sistemi ile ev sinek carboxylesterase proteinler vitro üretmek ve daha sonra işlevsel olarak Permetrin, metabolize onların rolleri böylece, karakterize bir protokol pyrethroid veriyor mevcut rezistansının hücre tabanlı MTT tahlil ve vitro metabolik çalışmalar yürütmektedir.

Carboxylesterases böcek ilacı dayanıklı ev sinekleri, sinek Domestica içinde işlevsel karakterizasyonu

Burada, bitki salgılanan proteinler için protein kristalizasyon büyük miktarlarda üretmek için böcek hücre ve baculovirus protein ifade sistemi kullanan iletişim kurallarını mevcut. Bir baculovirus ifade vektör GP67 ya da böcek hemolin sinyal peptid bitki protein salgılanması ifade böcek hücrelerinde ile değiştirildi.

Bitki proteinleri böcek hücrelerinde salgılanan Baculovirus ifade vektörel çizimler oluşturmak için değiştirme

Baculovirüs ekspresyon vektör sistemi (BEVS), biyokimyasal, biyofiziksel ve yapısal çalışmalarda kullanılacak protein arginin metiltransfenazlarının (PRMT) ekspresyon taraması ve üretimi için sağlam bir platformdur. Milligram miktarda malzeme, ökaryotik bir ifade platformu gerektiren PRMT'lerin ve diğer ilgi proteinlerinin çoğunluğu için üretilebilir.

Baculovirüs Ekspresyon Vektör Sistemi Kullanılarak Rekombinant PRMT Proteinlerinin Üretimi

İnsan zarı taşıyıcılarının yapısal ve biyokimyasal çalışmaları, miligram miktarlarda kararlı, sağlam ve homojen protein gerektirir. Burada, kodon için optimize edilmiş genleri kullanarak insan çözünen taşıyıcı taşıyıcıları taramak, eksprese etmek ve saflaştırmak için ölçeklenebilir yöntemleri açıklıyoruz.

Yapısal ve biyokimyasal çalışmalar için insan çözünen taşıyıcılarının yüksek verimli ekspresyonu ve saflaştırılması

Öğrenin lepidopteran larvalarında baculovirus ağız enfeksiyonu tekniklerini ve insektisidal etkinliği değerlendirmeyi. Damla besleme ve diyet tıpası biyoassay yöntemleri ölümcül dozları belirlemeye yardımcı olur.

Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri

Daha fazla video keşfet