Baculovirus lepidopteran Larva Ağız Enfeksiyon Protokolleri

Bu video, böcek etkinliğini belirlemek için bakülovirüs lepidopteran larvaları oral bulaşma tekniklerini göstermektedir.

Vao virüsü, protein ekspresyonu için böcek hücre hatları ile kombinasyon halinde kullanılan bir DNA vektörü olarak yaygın olarak kullanılır. Bununla birlikte, bu virüsün böcekleri öldürücü sonuçlarla verimli bir şekilde enfekte etmesi, onu aynı zamanda etkili bir böcek öldürücü ajan yapar. Örneğin Brezilya'da, vahşi tip balo virüsü, kadife fasulye tırtılının böcek öldürücü etkinliklerini arttırmak için kontrol altına alınması için yılda 1 milyon hektardan fazla soya fasulyesi mahsulüne uygulanır, Balo virüsleri, böceğin HemosIL'inde aktif olan böceklere özgü toksinleri kodlayan genlerle genetik olarak tasarlanmıştır.

Bu videoda, böcek öldürücü etkinliği analiz etmek için lepidopteran larvalarının bacao virüsü ile oral enfeksiyon yöntemlerini gösteriyoruz. Merhaba, ben Oftalmoloji Bölümü ve Iowa Eyalet Üniversitesi'ndeki Kör Kemik laboratuvarındanım ve ben de kemik laboratuvarından Wendy Sparks. Bugün size lter ve larvaların VA virüsü enfeksiyonu için iki prosedür göstereceğiz.

İlk olarak, harran size bir damlacık besleme biyotahlili kullanarak yenidoğan larvalarını nasıl enfekte edeceğinizi gösterecektir. Ve sonra size bir diyet kan biyotahlili kullanarak orta ila geç instar larvalarını nasıl enfekte edeceğinizi göstereceğim. Öyleyse başlayalım.

Damlacık besleme biyoanalizleri, abakavirin öldürücü dozunun belirlenmesi ve sağkalım için kullanılabilir. Balo virüsü ile enfekte olmuş larvaların zamanı. Bu test için genellikle erken instar veya yenidoğan larvaları kullanılır.

Başlamadan önce, elinizde uygun diyetin bulunduğu diyet kaplarına sahip olduğunuzdan emin olun. Ayrıca, uygun virüsü hazırlayın Seyreltmeler, hacimce% 4'lük bir konsantrasyona kadar yeşil gıda boyası boyasını içerir. Öldürücü viral konsantrasyonu belirlemek için, seyreltme bir ila %99 arasında bir mortalite aralığı vermelidir Polihedranın çökelmesini önlemek için tüpü girdapladıktan sonra uygun bir virüs konsantrasyonu aralığını belirlemek için ön biyoanalizler gerekebilir, 60 milimetrelik bir Petri kabında virüs çözeltisinin küçük damlacıklarından oluşan iki eşmerkezli daire oluşturun.

Kullanılan her virüs konsantrasyonu için, bir negatif kontrol sahte enfeksiyonu da ayarlamayı unutmayın. Tedavi Daha sonra, 25 ila 30 yenidoğan larvasını steril bir boya fırçası kullanarak eşmerkezli dairelerin ortasına aktarın. Kapağı tabağın üzerine yerleştirin ve larvaların kaçmasını önlemek için paraform ile kapatın.

İdeal olarak, tedaviler arasında kontaminasyonu önlemek için her virüs türüne aktarım için farklı boya fırçaları kullanın. Çanağın oda sıcaklığında 10 ila 15 dakika bekletilmesine izin verin, bu süre zarfında larvalar içer. Beslenen çözelti larvaları, yeşil gıda boyası boyasının sadece bir onsluk plastik kaplara beslenen larvaları transfer etmesinden kaynaklanan ön bağırsağın yeşil renklenmesi ile tanımlanabilir, bu da diyet transferi fincan başına bir larva içerir.

Larvaları aktardıktan sonra, kapları kapaklarla kapatın ve enfeksiyondan 24 saat sonra 28 santigrat derece inkübe edin. Ölü larva içeren kapları ortadan kaldırın. Bu erken ölümler muhtemelen taşıma yaralanmasından kaynaklanmaktadır.

Öldürücü dozu belirlemek için bu biyo-tahlili kullanırken, larvalar, sahte enfekte larvalar ve hayatta kalan herhangi bir virüs ile tedavi edilen larvalar purize olana veya virüs ile enfekte olmuş larvaları pupa etmek için ödünç almaya başlayana kadar her iki ila üç günde bir kontrol edilmelidir. Ölü larvalar bazen mein ve enfeksiyondan ölen siyah larvaları esasen tamamen çözülecek olan polihedra torbaları haline gelir. Bu sırada mekanik olarak bozulursa, her tedavide larva ölüm oranını puanlayın.

Öldürücü konsantrasyon biyo-tahlilleri ayrı durumlarda üç veya dört kez tekrarlanmalıdır. Her virüs veya kontrol tedavisi için doz başına 30 kişi kullanın. Lc 50 değerlerini, %95 güven aralıklarını ve uygun istatistikleri hesaplamak için polo veya SAS gibi uygun bir veraset analiz programı kullanın.

Bu damlacık besleme testi, ST 50 sağkalım süresi değerlerini belirlemek için de kullanılabilir. Bu durumda, larva ölümleri daha sık gözlemlerle her dört ila sekiz saatte bir puanlanır. Mortalite oranı yüksekse, sağkalım süresi, lc 99 doz virüs medyan sağkalım süreleri kullanılarak biyotestler yapılır ve %95 güven sınırları, bir s plus veya SAS programı kullanılarak Kaplan Mayer tahmincisi kullanılarak hesaplanır.

Artık Harang size damlacık besleme biyo-tahlilini gösterdiğine göre, ben de size diyet fişi biyotahlilinde diyet fişi biyotahlilini göstereceğim. Orta ila geç Instar larvaları, bu testin yapılmasından bir gün önce öldürücü dozu veya LD 50'yi belirlemek için bilinen bir virüs dozu ile tedavi edilmiş bir diyet tıkacı ile beslenir. Gece boyunca larvaları aç bırakmak için diyeti bardaktan çıkarın.

Bu adım, larvaların virüsü tüketme hızını artıracaktır. Aşılanmış diyet küpü ertesi gün, diyeti yaklaşık iki milimetreküp küçük küpler halinde keserek hazırlayın. Diyet küpleri çok küçükse kururlar.

Diyet küpleri çok büyükse, larvalar tüm diyet küpünü gece boyunca tüketemezler. Şimdi her diyet küpüne bir ila iki mikrolitre polihedra süspansiyonu ekleyin. Süspansiyon hacimce %4 gıda boyası içerir.

Süspansiyonun diyete beş ila 15 dakika girmesine izin verin. Negatif kontrol olarak sahte bir virüs muamelesi görmüş diyet küpü hazırlamayı da unutmayın. Daha sonra, her fincandaki her dördüncü instar larvasına bir diyet küpü aktarın.

Daha sonra bardakları ertesi gün 28 santigrat derecede gece boyunca kuluçka makinesine koyun, diyet küpünü tamamen yememiş larvaları atın. Daha sonra kalan larvalar için her bardağa büyük bir diyet parçası ekleyin. Larvaları 28 santigrat derecede tutun, sahte enfekte larvalar ve hayatta kalan virüs enfekte larvalar tüpeleşene veya pupa olmaya başlayana kadar gerektiği kadar ek diyet ekleyin.

Şu anda, ölü ve hayatta kalan böceklerin sayısını kaydedin. Böcekleri sırt virüsü, kanama, beslenme biyopsisi ve diyet plağı biyopsisi ile enfekte etmek için size sadece iki yöntem göstereceğiz. Bu prosedürü yaparken, vao virüsü tarafından öldürülen larvaların tipik olarak kırılgan olduğunu ve virüsü serbest bırakarak kolayca yırtılabileceğini hatırlamak önemlidir.

Bu nedenle, kontaminasyonu önlemek için çalışma yüzeylerini sterilize edin ve kontamine eldivenleri ve tek kullanımlık malzemeleri uygun bir şekilde atın. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde iyi şanslar.