Name: Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Öğrenin, Xenopus laevis dişilerinden yumurta elde etme ve hazırlama yöntemlerini. Bu protokol, hücre biyolojisi ve gelişim biyolojisi araştırmalarında kaliteli yumurta elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri</a> .

Yazarların beyan edilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

xenopus laevis dişiler yumurta alınması

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Xenopus, yumurta, parçalanmış, bozulmamış ve / veya fraksiyone çeşitli deneyler için yararlıdır laevis. Bu protokol, yumurtlama neden yumurtaları toplamak ve dejelly ve herhangi bir hasarlı yumurta kaldırmak için yumurta sıralamak nasıl gösterir.

Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması

Xenopus laevis yumurtalarının sağlam, lizlemiş ve/veya fraksiyonlarına ayrılmış halleri, çok çeşitli deneyler için faydalıdır. Bu protokol, yumurtlama işleminin nasıl tetikleneceğini göstermektedir, ...

Xenopus labis yumurta özütleri, nükleer montaj ve nükleer protein importu gibi hücresel olayların in vitro yeniden yapılandırılması için sitoplazmik ve organel materyal kaynakları olarak yararlıdır. Elbette, yumurta özütlerini kullanabilmeniz için öncelikle yumurtaları dişi kurbağalardan elde etmeniz gerekir. Merhaba, ismim Marie Cross; Georgia, Atlanta'daki Emory Üniversitesi Hücre Biyolojisi Bölümü'nde Dr. Maureen Power'ın laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim.Bugün size olgun Xenopus laevis dişilerinden nasıl yumurta elde edileceğini ve bunların nasıl ayrıştırılacağını göstereceğiz. Bu prosedür şu adımları içermektedir: hamile kurbağaların yumurtlaması için hazırlanması, yumurtlamayı uyarmak için insan koryonik gonadotropini ile serum gonadotropini uygulanması ve bozuk yumurtaların veya oositlerin ayıklanması. Haydi başlayalım.Yumurta üretimi için, olgun dişi kurbağalar öncelikle gebelikle ilişkili kısrak serum gonadotropini ile ön işleme tabi tutulur. Ön işleme prosedürüne başlamak için, kurbağaları barındırmak amacıyla yüz milimolar sodyum klorür içeren bir tank hazırlayın. Enjeksiyondan sonra, ön işlem gören kurbağalar yaklaşık litre başına bir kurbağa yoğunluğunda tutulmalıdır.Kurbağalar 18 °C'de barındırılarak optimal yumurta üretimi sağlanır. Bir mililitrelik şırıngaya takılmış 27 gauge iğne kullanarak, kurbağanın dorsal lenf kesesine 0,5 mL'lik 200 unit/mL konsantrasyonda gebelikte kısrak serum gonadotropini enjekte edin.Hazırlanan kurbağaları 100 mM sodyum klorür içeren tanka geri yerleştirin. İki ila üç gün sonra, kurbağaların dorsal lenf kesesine deri altına tekrar 0,5 ml 100 IU/ml insan koryonik gonadotropini enjekte ederek yumurtlamayı uyarın.Enjeksiyondan sonra, her kurbağayı beş litre 100 mM sodyum klorür içerisine yerleştirin. Yumurta kalitesi kurbağadan kurbağaya farklılık gösterdiği için her kurbağayı kendi kabına koymak en iyisidir. İnsan koriyonik gonadotropin enjeksiyonundan yaklaşık 16 ila 22 saat sonra, kurbağayı temiz su tankına alın ve yumurtaları bir behere boşaltın.Kurbağaların, enjeksiyon bölgesinde enfeksiyon belirtileri açısından bir ila iki gün boyunca gözlemlenmesi önerilir. Bu aşamada, her yumurtayı çevreleyen şeffaf bir jöle tabakası, yumurtaların birbirine temas etmesini önler; jöleli yumurtaları temizlemek için, yumurtaları bir kez %2L sistein pH 8 ile durulayın, ardından her kurbağa için %2L sistein çözeltisi içeren yüz adet kapta yaklaşık beş dakika boyunca inkübasyona devam edin. Oda sıcaklığında, beş dakika sonra yumurtaları periyodik olarak nazikçe çalkalayın.Sistein çözeltisini deje yumurtalarının üzerinden dökün ve yumurtaları 0.25 x modifiye ringer çözeltisi ile üç kez yıkayın. Kalıntıları temizlemek için, bir diseksiyon mikroskobu altında çalışarak yumurtaları yüz milimetrelik cam bir Petri kabına aktarın. Bozuk yumurtaları bir pastör pipeti ile Petri kabından çıkarın.Olgun xip yumurtalarının üst yarısı koyu renkli, alt yarısı ise açık renklidir. Olgun yumurtanın koyu renkli yarım küresinin merkezinde, oosit olgunlaşmasını belirten iğne ucu büyüklüğünde beyaz bir nokta görülmelidir. İyi bir yumurta, pigmentasyonu düzgün ve modellemiş olan yumurtadır.Bu beyaz lekeye sahip olmayan her şey bir oositdir ve uzaklaştırılmalıdır. Beyazlaşmış, büyümüş veya pigmentasyonu homojen olmayan tüm yumurtalar da uzaklaştırılmalıdır. Özellikle sorunlu bir yumurta, hemisferler arasındaki sınırın tamamen belirsizleştiği beyaz, şişkin bir top şeklinde görünecektir; ayrıştırılmış yumurtaları, üzerlerine yumurta lizleme tamponu döküp ardından tamponu dikkatlice dökerek, yumurtaların dışarı taşmasını minimize edecek şekilde iki ila üç kez yıkayın.Artık yumurtalar lizatlanabilir ve ekstraktlar hazırlanabilir. Size olgun Xenopus laevis dişilerinden yumurtaların nasıl elde edileceğini ve jöle tabakasının nasıl temizleneceğini göstermiş olduk. Ham yumurta ekstraktlarının nasıl hazırlanacağını ve fraksiyone edilmiş yumurta ekstraktları kullanılarak in vitro nükleer montajın nasıl yeniden oluşturulacağını gösteren diğer iki videomuzu da izlediğinizden emin olun.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Gübrelenmesi Xenopus oositleri Host Transfer Yöntemi kullanılarak

Xenopus embriyonik epitel, epitel morfolojilerinden sırasında kutup geliştirme ve şekil değişikliği gibi hücre davranışlarını incelemek için ideal bir model sistem . Geleneksel sabit örnekleri histoloji giderek canlı hücre konfokal görüntüleme tarafından tamamlanmaktadır. Burada, kurbağa dokularda izole ve canlı hücre konfokal mikroskopi kullanılarak canlı epitel hücreleri ve hücre iskeletinin görselleştirmek için yöntemler göstermektedir.

Canlı hücre Görüntüleme ve Kantitatif Analiz Embriyonik Epitel Hücreleri Xenopus laevis</em

Xenopus yumurta özü DNA hasarı kontrol noktasında araştırmak için yararlı bir model sistemidir. Bu protokol, Xenopus yumurta özü ve DNA hasarına neden olan kontrol noktası reaktiflerin hazırlanması içindir. Bu teknikler DNA hasar kontrol noktası sinyalleşmenin çalışmada DNA hasarına yaklaşımların çeşitli uyarlanabilir.

Kullanılarak DNA hasar Checkpoint incelenmesi<em&gt; Xenopus</em&gt; Yumurta ayıklar

Üretimi<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Yumurta Mikrotubul ilişkili RNA&#39;lar tanımak ayıklar

Bir yöntem olup Xenopus yumurta özü ve protein degradasyon küçük molekül modülatörleri için yüksek miktarda madde taraması için uyarlanması radyoaktif olarak etiketlenmiş ve lusiferaz füzyon proteinleri kullanılarak protein degradasyonunu analiz edilmesi için anlatılmıştır.

Β-katenin Bozulması Of Sulandırma<em&gt; Xenopus</em&gt; Yumurta Özü

Xenopus laevis immatür oositlerini manipüle etme, oositlerin yumurtalara in vitro olgunlaşması ve intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu yöntemlerini açıklıyoruz. Bu protokol, bazı maternal proteinlerin bozulmasına ve döllenmede ilgilenilen genlerin aşırı ekspresyonuna izin verir ve bu nedenle erken embriyonik gelişimde spesifik faktörlerin rollerini incelemek için değerlidir.

Manipülasyon ve<em&gt; İn Vitro</emVe&gt; Olgunlaşma<em&gt; Xenopus laevis</emIntrasitoplazmik sperm enjeksiyonu izledi&gt; oositler, Embriyonik Geliştirme Çalışması

Protein sentezi kontrolü esas olarak translasyon başlatma adımında gerçekleşir, eksiklikler çeşitli bozukluklarla bağlantılıdır. Etiyolojilerini daha iyi anlamak için, burada translasyon başlatma faktörü eIF4G1'in bir mutantının varlığında mos transkriptinin translasyonunu değerlendiren Xenopus laevis oositlerini kullanan bir protokol tanımladık.

Ksenopus Translation Düşüklüğü Belirlemek için Bir Model Olarak laevis

Hücresel ve hücre içi ölçekleme mekanizmaları hala belirsizliğini koruyor. Xenopus embriyo ekstraktlarının kullanımı, organel boyutu düzenleme mekanizmalarını aydınlatmak için giderek daha yaygın hale gelmiştir. Bu yöntem, embriyo ekstraktının hazırlanmasını ve nükleer boyut düzenleme mekanizmalarının tanımlanabildiği yeni bir nükleer ölçekleme testini tanımlar.

Kullanılarak hücresiz Deneyi<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyo Nükleer Boyut Yönetmeliğin Mekanizmaları Eğitim için ayıklar

Bu protokol, vaskülatürü görselleştirmek ve Xenopus tropicalis'deki karmaşıklığını niceleştirmek için flüorüre dayalı bir yöntemi göstermektedir . İn vivo kardiyovasküler gelişimi incelemek için genetik ve / veya farmakolojik manipülasyonlardan sonra bir embriyonun kalp atımına floresan bir boya enjekte edildikten birkaç dakika sonra kan damarları görüntülenebilir.

Embriyonik Anjiyojenezin Görselleştirilmesi ve Nicel Analizi<emXenopus tropicalis</em

Xenopus laevis yumurtalarından seyreltilmemiş sitoplazmik ekstraktların hazırlanması ve canlı görüntülenmesi için bir yöntem tanımladık.

Xenopus laevis Dinamik Sitoplazmik Organizasyonu Görselleştirmek için Yumurta Ekstresi Hazırlama ve Canlı Görüntüleme Yöntemleri

Büyüme Faktörü ß aile öncül proteinlerinin dönüştürülmesi Xenopus laevis embriyolarında ektopik olarak ifade edildiğinde, küçülürler, bölünürler ve erken gastrula aşamasına geç blastülde başlayan blastokoele salgılanırlar. İmmünoblot analizi için blastocoele boşluğundan dekolte ürünlerini aspire etmek için bir yöntem açıklıyoruz.

Xenopus laevis Embriyolarının Blastocoele'sine Salgılanan Dönüşüm Faktörü ß Aile Bölünmesi Ürünlerinin Analizi

Öğrenin, Xenopus laevis dişilerinden yumurta elde etme ve hazırlama yöntemlerini. Bu protokol, hücre biyolojisi ve gelişim biyolojisi araştırmalarında kaliteli yumurta elde etmeyi sağlar.

Xenopus laevis Dişiler Yumurta Alınması

Daha fazla video keşfet