Name: Vitro Nükleer Meclisi fraksiyonlara Xenopus Yumurta ayıklar kullanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-02T13:52:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Öğrenin, Xenopus yumurta ekstreleri kullanarak in vitro nükleer meclisi fraksiyonlara ayıklama yöntemini. Bu protokol, hücre biyolojisi araştırmalarında nükleer oluşum mekanizmalarını karakterize etmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ">Hücresel Biyoloji Şu Protokolleri</a> .

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

vitro nükleer meclisi fraksiyonlara xenopus yumurta ayıklar kullanma

In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

Nükleer membran montaj hücre bölünme döngüsünde önemli bir adım; Xenopus sperm kromatin, sitozolde ve hafif membran kesirler bir araya getirerek bu süreci test tüpüne çoğaltılmış olabilir. Gözenek kompleksleri ile nükleer membranlar da dahil olmak üzere Komple çekirdekleri oluşur ve bu sulandırılmış çekirdeklerinin normal nükleer süreçlerin yeteneğine sahiptir.

Vitro Nükleer Meclisi fraksiyonlara Xenopus Yumurta ayıklar kullanma

Nükleer zar oluşumu, hücre bölünme döngüsünde temel bir adımdır; bu süreç, Xenopus spermi ile ... birleştirilerek deney tüpünde tekrarlanabilir.

Xenopus labus yumurta ekstraktları, nükleer montaj ve nükleer protein transportu gibi hücresel olayların in vitro rekonstitüsyonu için sitoplazmik ve organel materyali olarak faydalıdır. Sperm kromatin DNA'sı, kaba veya fraksiyone edilmiş XUS yumurta ekstraktlarından herhangi birine eklendiğinde, ekstraktda bulunan membran vezikülleri kromatin yüzeyine bağlanır, kaynaşır ve tam fonksiyonel sentetik çekirdekler oluşturmak için nükleer por bileşenlerini bünyesine katar. Bu süreçlerin moleküler temelinin karakterizasyonu, daha sonra ekstraktların immünosorpsiyon yoluyla boşaltılması ve protein modifikasyonu ile gerçekleştirilebilir.Merhaba, benim adım Marie Cross. Atlanta, Georgia'daki Emory Üniversitesi Hücre Biyolojisi Bölümü'nde Dr. Maureen Power'ın laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim. Bugün size, fraksiyone edilmiş ksenopus yumurta ekstraktları kullanarak in vitro çekirdek oluşumunun nasıl gerçekleştirileceğini göstereceğiz. Bu prosedür; nükleer montaj reaksiyonunun gerçekleştirilmesi ve çekirdek oluşumunun değerlendirilmesi adımlarını içermektedir.Hadi başlayalım. Nükleer montaja başlamak için, fraksiyone edilmiş sitozolden bir alikot alın ve 0,2 molar stoktan, final konsantrasyonu 20 millimolar olacak şekilde fosfokreatin ekleyin. Ardından, beş miligram per milliliter stoktan, final konsantrasyonu 50 micrograms per mil olacak şekilde kreatin kinaz ekleyin.Son olarak, 0.2 molar stok kullanarak 20 micromolar A TP ekleyin. Ardından, hafif membranları sitozole 1'e 10 dilüsyonda ekleyin. Bu işlem, orijinal ham özütte bulunan membran miktarını yaklaşık olarak sağlar.Membranları ekstrakt içinde dağıtmak için tüm bileşenleri pipetle yukarı-aşağı hareketlerle karıştırın. Bu işlem, sperm kromatini eklenmeden önce gerçekleştirilmelidir. Ardından, istenen konsantrasyonda sperm kromatinini fraksiyone edilmiş ekstrekte ekleyin ve ekstrakt ile spermi, ucu kesilmiş bir pipet ucuyla nazikçe yukarı-aşağı pipetleme yaparak derhal birlikte karıştırın.Sperm kromatini ekstreye eklendiğinde, hemen dekondense olmaya, yoğunlaşmaya ve makaslamaya karşı duyarlı hale gelmeye başlar. Genellikle bu reaksiyonlar, toplam hacmi yüz mikrolitreden az olacak şekilde 500 mikrolitrelik santrifüj tüplerinde kurulur. Yumurta ekstreleri, 8.000 ila 9.000'e kadar oluşumu destekleyecektir.Mikrolitre başına çekirdek sayısı; çekirdeklerin oluşmasını sağlamak için karışımı oda sıcaklığında bir ila iki saat boyunca inkübe edin. Çekirdekler boyama yöntemiyle görselleştirilir. Yaklaşık 30 dakika sonra, yeni oluşan çekirdekler küçük ve oval yapıda olacaktır.DNA hâlâ oldukça yoğundur ve DNA yoğunlaştıkça, UV kanalında gözlemlendiğinde çekirdek, hook spinning nedeniyle düz açık mavi renkte görünmelidir. Ayrıca, mavi boyama daha az homojen olacak ve zamanla siyah boşluklar belirecektir. Çekirdek zarı oluşumu, tespit sıvısına erkek başına bir mikrogram 3,3-diaminocarboxamine veya DHCC ekleyerek görselleştirilebilir.DHCC, floresein kanalında görüntülenen floresan lipofilik bir boyadır. Çekirdek birikiminin erken evrelarında, membran vezikülleri kromatin yüzeyine bağlanır ve yamalar halinde kaynaşmaya başlar. Bu durum, oluşan membranın düzensiz ve kesintili bir görünüm kazanmasına yol açar.Membran tamamlandığında, nükleer yüzey üzerinde düzleşir ve DNA etrafında düzgün, kesintisiz bir halka şeklinde görünür. Çekirdeklere dahil olmamış membran vezikülleri nedeniyle çevreleyen sitozolde hatırı sayılır miktarda arka plan floresansı olacaktır. Size, xenopus yumurta ekstraktından elde edilen çözünür ve hafif membran fraksiyonlarını kullanarak in vitro nükleer yeniden yapılandırmayı göstermiş olduk.Ham ekstraktın nükleer montaj için kullanılabileceğini, ancak dondurma ve çözme işleminden sonra kullanılamayacağını unutmamak önemlidir. Hepsi bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

in-vitro-nuclear-assembly-using-fractionated-xenopus-egg-extracts

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Ham ve fraksiyone Xenopus yumurta özleri, morfolojik ve biyokimyasal analiz için hücresel süreçleri yeniden maddeler sağlamak için kullanılabilir. Yumurta parçalama ve diferansiyel santrifüj teslim fraksiyone özü ve hafif membran preparatları hazırlamak için kullanılan ham elde etmek için kullanılır.

Xenopus laevis Yumurta hazırlanması ve Fraksiyonu ayıklar.

İşte biz sitoplazmik mikroenjeksiyon...

Xenopus laevis Oosit, Mikroenjeksiyon

Bu video protokol transgenik üretmek için bir yöntem...

Transgenik, üretimi Xenopus laevis Kısıtlama Enzim aracılığı ile Entegrasyon ve Nükleer Nakli

Üretimi<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Yumurta Mikrotubul ilişkili RNA&#39;lar tanımak ayıklar

Bir yöntem olup Xenopus yumurta özü ve protein degradasyon küçük molekül modülatörleri için yüksek miktarda madde taraması için uyarlanması radyoaktif olarak etiketlenmiş ve lusiferaz füzyon proteinleri kullanılarak protein degradasyonunu analiz edilmesi için anlatılmıştır.

Β-katenin Bozulması Of Sulandırma<em&gt; Xenopus</em&gt; Yumurta Özü

Xenopus laevis immatür oositlerini manipüle etme, oositlerin yumurtalara in vitro olgunlaşması ve intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu yöntemlerini açıklıyoruz. Bu protokol, bazı maternal proteinlerin bozulmasına ve döllenmede ilgilenilen genlerin aşırı ekspresyonuna izin verir ve bu nedenle erken embriyonik gelişimde spesifik faktörlerin rollerini incelemek için değerlidir.

Manipülasyon ve<em&gt; İn Vitro</emVe&gt; Olgunlaşma<em&gt; Xenopus laevis</emIntrasitoplazmik sperm enjeksiyonu izledi&gt; oositler, Embriyonik Geliştirme Çalışması

Yüksek derecede sıkıştırılmış mitotik kromatinin deyoğunlaşmasının moleküler mekanizmaları tam olarak tanımlanmamıştır. HeLa hücrelerinden izole edilen mitotik kromatin kümelerine ve in vitro dekondensasyon sürecini aslına uygun olarak yeniden oluşturan Xenopus laevis yumurta ekstraktına dayanan hücresiz bir test sunuyoruz.

Hücre Testi Mitoz Sonu Kromatin dekondenzasyon Eğitim için

Yetkin ektodermde bir yanıtı indükleyebilen genlerin ekspresyon klonlaması için bir Xenopus oosit ve hayvan başlığı sistemini tanımlıyoruz ve bu tür genlerin sonraki analizi için teknikleri tartışıyoruz. Bu sistem, çok çeşitli gen ürünlerinin fonksiyonel olarak tanımlanmasında faydalıdır.

Bir kullanılması Fonksiyonel Klonlama<em&gt; Xenopus</em&gt; Oosit ekspresyon sistemi

Hücresel ve hücre içi ölçekleme mekanizmaları hala belirsizliğini koruyor. Xenopus embriyo ekstraktlarının kullanımı, organel boyutu düzenleme mekanizmalarını aydınlatmak için giderek daha yaygın hale gelmiştir. Bu yöntem, embriyo ekstraktının hazırlanmasını ve nükleer boyut düzenleme mekanizmalarının tanımlanabildiği yeni bir nükleer ölçekleme testini tanımlar.

Kullanılarak hücresiz Deneyi<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyo Nükleer Boyut Yönetmeliğin Mekanizmaları Eğitim için ayıklar

Biz petrol su microemulsions içinde Xenopus laevis yumurta özleri Kapsüllenen tarafından vitro kendini sürekli mitotik salınımlarını tek hücre düzeyinde nesil için bir yöntem mevcut.

Microemulsions boş hücre Xenopus yumurtanın hücre döngüsü salınımlarını sulandırma ayıklar

Xenopus laevis yumurtalarından seyreltilmemiş sitoplazmik ekstraktların hazırlanması ve canlı görüntülenmesi için bir yöntem tanımladık.

Xenopus laevis Dinamik Sitoplazmik Organizasyonu Görselleştirmek için Yumurta Ekstresi Hazırlama ve Canlı Görüntüleme Yöntemleri

Öğrenin, Xenopus yumurta ekstreleri kullanarak in vitro nükleer meclisi fraksiyonlara ayıklama yöntemini. Bu protokol, hücre biyolojisi araştırmalarında nükleer oluşum mekanizmalarını karakterize etmek için kullanılır.

Vitro Nükleer Meclisi fraksiyonlara Xenopus Yumurta ayıklar kullanma

Daha fazla video keşfet