Yetişkin Fare Olfaktör Davranış Testi

Rodin koku sistemi veya koku alma duyusu giderek daha popüler bir araştırma alanı haline gelmiştir. Koku hassasiyetini test etmek amacıyla, bir fare öncelikle altlık bulunmayan bir kafeste alışmaya bırakılır ve ardından artan konsantrasyonlarda koku maddesi içeren filtre kağıdı parçalarına maruz bırakılır. Farenin filtre kağıdını incelemek için harcadığı süre daha sonra kaydedilir.

Koku tercihi testi de tamamen aynı şekilde gerçekleştirilir. Ancak, koku maddesi konsantrasyonlarını artırmak yerine, farenin farklı koku maddelerini incelemek için harcadığı süre kaydedilir. Merhaba, ben Harvard Tıp Fakültesi Nörobiyoloji Bölümü'ndeki Dr. Rosalyn Siegel Laboratuvarı'ndan Rochelle Witt.

Merhaba, ben de Siegel Laboratuvarı'ndan Jennifer Deno. Bugün size koku testi için iki prosedür göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürleri koku hassasiyetini ve koku tercihini incelemek için kullanıyoruz.

Hadi başlayalım. Koku hassasiyeti test prosedürüne başlamak için, tamamı altlığa sahip olmayan dört adet temiz kafes temin edin. Kafesler 8 inç yüksekliğinde, 10 inç genişliğinde ve 18 inç uzunluğunda olmalıdır.

Dört kafesi bir biyogüvenlik kabininde yan yana dizin. Ardından, her arena arasına opak filtre kağıdı kullanarak bölmeler yerleştirin. Daha sonra, son bölmenin üzerine, kafesin yan ve alt kısmını kaplayacak şekilde siyah bir karton yerleştirin.

Kafesin üst kısmını şeffaf bir pleksiglas parçasıyla kapatarak arenanın aydınlanmasını sağlayın. Şimdi deneklerin alıştırma sürecine başlayın. İlk deneği birinci kafese yerleştirin.

15 dakika sonra, birinci deneyi ikinci kafese taşıyın. Birinci kafesi Quatra side tb ile temizleyin. Ardından, ikinci deneyi temizlenmiş olan birinci kafese yerleştirin.

Testten önce bu işlemi sonraki deneklerle tekrarlayın. Deneklerden birini dördüncü kafese yerleştirin ve 15 dakika daha alışma süreci uygulayın. Sonuç olarak, ilk üç kafesin her birinde bir denek alışmış olmalıdır.

Artık koku örneklerini hazırlamaya hazırız. Koku örnekleri; deneklere, genotiplere ve/veya koşullara dair bilgisi olmayan farklı bir araştırmacı tarafından hazırlanmalıdır. Örnek hazırlama işlemine, uygun sayıda iki inç boyutunda kare filtre kağıtları keserek başlayın.

Ardından, önceden seçilen kokunun uygun seyreltmelerini konik tüplerde hazırlayın. Farklı fare arka planlarının, kontrol ve deney grupları arasında etkili bir ayrım yapılabilmesi için farklı koku seyreltmeleri gerektirebileceğini unutmayın. Bu gözlem nedeniyle, saf farelerle yapılacak deneysel testlere geçmeden önce, kontrol grubuna benzer denekler üzerinde uygun koku seyreltmelerini ampirik olarak belirlemenin faydalı olduğunu görmekteyiz. Fıstık ezmesi gibi hidrofobik örnekler için çözücü olarak yağ kullanın, diğer tüm örnekler için ise uygun diğer çözücüleri tercih edin.

Seyreltmelerin düzgün şekilde karıştığından emin olmak için distile su ile vorteksleyin. Ardından, dijital bir video kayıt cihazını, kafesin tüm uç kısmı odakta olacak şekilde çeker ocağın uzak ucuna yerleştirin. Kamera ayarlarının yeterli olduğunu doğrulamak için ön bir video çekimi yapın.

Bir laboratuvar defterine, her denemede sırayı rastgele seçmeye özen göstererek, dilüsyonların test edileceği sırayı kaydedin. Ayrıca deneğin batın ve tanımlama numaralarını da kaydedin. Denek arenada 15 dakika boyunca alıştıktan sonra, ilk deneme için hazırlıklara başlayın.

İlk dilüsyonu filtre kağıdı karesine aktarmadan önce konik tüp içerisinde pipetle ileri geri çekerek karıştırın. Filtre kağıdı yüzeyinin optimal olarak yaklaşık %85 oranında kaplanmış olması gerekir. Filtre kağıdının aşırı doygun olmadığından emin olmak için Kim wipe kullanın.

Kokulu filtre kağıdı hazırlandığına göre, ilk koku hassasiyeti denemesini gerçekleştirmeye hazırız. Denemeye başlamak için video kaydını başlatın. Ardından, kokulu filtre kağıdını kafesin içinde, hayvanın mevcut konumunun karşı ucuna yerleştirin.

Süreyi başlatın. Üç dakika sonra kaydı durdurun ve kokuyu uzaklaştırın. Ardından, zamanlayıcıyı tekrar başlatın ve ikinci bir koku örneği hazırlayın.

Bir dakika sonra video kaydına başlayın. Daha önce olduğu gibi, koku örneğini kafesin hayvanın mevcut konumunun karşı ucuna yerleştirin. Bu prosedürü her koku seyreltmesi ve her denek için tekrarlayın; her deneme için video dosya numarasını kaydetmeyi unutmayın.

Koku hassasiyeti testini gösterdiğimize göre, koku tercihi testi ile devam edin. Koku tercihi testi için, iki küçük modifikasyon dışında, koku hassasiyeti testi için açıklanan prosedürün aynısını izleyin. Birincisi.

Önceden seçilmiş tek bir kokunun birden fazla dilüsyonunu hazırlamak yerine, hem çekici hem de itici kokuları hazırlayın. İkinci olarak, test edilecek dilüsyonu kaydetmek yerine, her denemede sırayı randomize ederek test edilecek varyasyonların sırasını kaydedin. Deneklerin alıştırma süreci, körleme araştırmacı kullanımı, filtre kağıdına koku uygulanması ve her denemenin süreli video kaydı dahil olmak üzere prosedürdeki diğer tüm adımlar, koku testleri ile aynıdır.

Koku tercihi testi tamamlandığında, koku testlerinin puanlamasına geçin. Tüm koku hassasiyeti ve tercihi videoları topladıktan sonra, deneğin her bir dilüsyonu veya kokuyu keşfetmek için harcadığı toplam süreyi tutarlılık adına puanlayın. Bu analizi gerçekleştirmek için videoların kör bir araştırmacı tarafından analiz edilmesini sağlayın.

Öncelikle videoyu ön izlemek ve şu noktaları not etmek faydalı olacaktır: filtre kağıdının arenaya yerleştirildiği an, farenin filtre kağıdına yaklaştığı an, farenin filtre kağıdını incelediği an ve filtre kağıdının arenaya ilk yerleştirildiği andan itibaren üç dakikanın geçtiği an. Farenin davranışına ne zaman odaklanılacağını bilmek, inceleme sırasında toplam keşif süresini doğru bir şekilde puanlamayı kolaylaştırır; şimdi videonun tamamını gözden geçirin. Filtre kağıdının arenaya yerleştirilmesini takip eden üç dakika içindeki tüm inceleme sürelerini ölçmek için bir kronometre kullanın.

İnceleme süresi, farenin burnunun filtre kağıdından bir milimetreden daha az uzaklıkta olduğu herhangi bir süre olarak tanımlanır; farenin filtre kağıdına yakın olduğu ancak onu aktif olarak incelemediği sürelerin dahil edilmemesi önemlidir. Toplam keşif süresine kağıdı çiğneme ve yalama dönemlerinin yanı sıra kağıdın üzerine oturma dönemlerini dahil etmeyin. Koku alma davranışını doğru bir şekilde analiz etmek için bu kurallara sıkı ve tutarlı bir şekilde uyun.

Video kaydını inceleyip filtre kağıdını araştırırken harcanan toplam süreyi not ettikten sonra, analizi tüm videolar için tekrarlayın. İşte koku testlerinden elde edilen temsili sonuçlar. Bu ilk grafik, bir koku hassasiyeti eğitimi oturumuna ait sonuçları göstermektedir.

Deney grubu B veya kontrol grubu A'daki her bir fare, filtre kağıdı üzerindeki beş farklı tarçın özütü dilüsyonundan birine üç dakikalık tek bir seansta maruz bırakılmıştır. Filtre kağıdını keşfederek geçirilen toplam süre değerlendirilmiş olup, bu grafik bir koku tercihi testi seansının sonuçlarını göstermektedir. Her bir fare, filtre kağıdı üzerindeki farklı kokuların her birine üç dakikalık tek bir seansta maruz bırakılmıştır.

Filtre kağıdını keşfetmek için harcanan toplam süre değerlendirildi. Bu prosedürleri kullanırken yetişkin farelerde koku alma yeteneklerinin nasıl test edileceğini size göstermiş olduk; koku alma yeteneklerini, öğrenme ve hafıza gibi diğer yeteneklerle karıştırmadan doğru bir şekilde test etmek için deneyimsiz (naive) farelerin kullanılması önemlidir. İşte bu kadar.

İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.