Yetişkin Fare Olfaktör Davranış Testi

Rodin koku sistemi veya koku alma duyusu, giderek daha popüler hale gelen bir araştırma alanı olmuştur. Koku hassasiyetini test etmek için, bir fare önce altlık bulunmayan bir kafeste alışmaya bırakılır ve ardından artan konsantrasyonlarda koku maddesi içeren filtre kağıdı parçalarına maruz bırakılır. Ardından, farenin filtre kağıdını incelemek için harcadığı süre kaydedilir.

Koku tercihi testi de tamamen aynı şekilde gerçekleştirilir. Ancak, artan koku konsantrasyonları yerine, farenin farklı kokuları incelemek için harcadığı süre kaydedilir. Merhaba, ben Harvard Tıp Fakültesi Nörobiyoloji Bölümü'ndeki Dr. Rosalyn Siegel'in laboratuvarından Rochelle Witt.

Merhaba, ben de Siegel Laboratuvarı'ndan Jennifer Deno. Bugün sizlere koku testi için iki prosedür göstereceğiz. Bu prosedürleri laboratuvarımızda koku duyarlılığını ve koku tercihini incelemek için kullanıyoruz.

Hadi başlayalım. Koku hassasiyeti test prosedürüne başlamak için, tamamı altlığın bulunmadığı dört adet temiz kafes temin edin. Kafesler sekiz inç yüksekliğinde, 10 inç genişliğinde ve 18 inç uzunluğunda olmalıdır.

Dört kafesi bir biyogüvenlik kabininde yan yana dizin. Ardından, her arena arasına opak filtre kağıdı kullanarak bölmeler yerleştirin. Son olarak, kafesin yan ve alt kısmını kaplayacak şekilde son bölmenin üzerine siyah bir karton yerleştirin.

Kafesin üst kısmını şeffaf bir pleksiglas parçasıyla kapatarak arenanın ışık almasını sağlayın. Şimdi deneklerin alıştırma sürecine başlayın. İlk deneği birinci kafese yerleştirin.

15 dakika sonra, ilk deneyi ikinci kafese taşıyın. İlk kafesi Quatra side tb ile temizleyin. Ardından, ikinci deneyi temizlenen ilk kafese yerleştirin.

Test öncesinde bu işlemi sonraki deneklerle tekrarlayın. Deneklerden birini dördüncü kafese yerleştirin ve 15 dakika daha alıştırma yapın. Nihayetinde, ilk üç kafesin her birinde bir denek alıştırılmış olmalıdır.

Artık koku örneklerini hazırlamaya hazırız. Koku örnekleri, deneklere, genotiplere ve/veya koşullara karşı kör olan farklı bir araştırmacı tarafından hazırlanmalıdır. Örnek hazırlığına, uygun sayıda iki inç boyutunda kare şeklinde filtre kağıtları keserek başlayın.

Ardından, önceden seçilen kokunun uygun dilüsyonlarını konik tüplerde hazırlayın. Farklı fare arka planlarının, kontrol ve deney grubu arasında etkili bir ayrım yapabilmek için kokunun farklı dilüsyonlarına ihtiyaç duyabileceğini unutmayın. Bu gözlem nedeniyle, saf farelerle deneysel testlere geçmeden önce, kontrol grubuna benzer denekler üzerinde uygun koku dilüsyonlarını ampirik olarak belirlemenin faydalı olduğunu saptadık. Fıstık ezmesi gibi hidrofobik örnekler için çözücü olarak yağ kullanın, diğer tüm örnekler için ise uygun olan çözücüyü seçin.

Seyreltmelerin düzgün şekilde karıştığından emin olmak için distile su ile vorteksleyin. Ardından, tüm kafes ucunun odakta kalacağı şekilde, çeker ocaktaki dijital video kayıt cihazını en uç kısma yerleştirin. Kamera ayarlarının yeterli olduğundan emin olmak için ön bir video çekimi yapın.

Bir laboratuvar defterine, her denemedeki sıranın rastgele olmasına dikkat ederek, dilüsyonların test edileceği sırayı kaydedin. Ayrıca deneğin batın ve tanımlama numaralarını da kaydedin. Denek arenada 15 dakika boyunca alıştıktan sonra, ilk deneme için hazırlıklara başlayın.

İlk dilüsyonu filtre kağıdı karesine pipetlemeden önce konik tüp içerisinde aşağı yukarı pipetleyerek karıştırın. Filtre kağıdı yüzeyinin yaklaşık %85 oranında kaplanması idealdir. Filtre kağıdının aşırı doygun olmadığından emin olmak için bir Kim wipe kullanın.

Kokulu filtre kağıdı hazırlandığına göre, ilk koku hassasiyeti denemesini gerçekleştirmeye hazırız. Denemeye başlamak için video kaydını başlatın. Ardından, kokulu filtre kağıdını kafesin içinde, hayvanın mevcut konumunun karşı ucuna yerleştirin.

Süreyi başlatın. Üç dakika sonra kaydı durdurun ve kokuyu uzaklaştırın. Ardından, zamanlayıcıyı tekrar başlatın ve ikinci bir koku örneği hazırlayın.

Bir dakika sonra video kaydına başlayın. Daha önce yapıldığı gibi, koku örneğini kafesin hayvanın mevcut konumunun karşı ucundaki kısmına yerleştirin. Bu prosedürü her koku dilüsyonu ve her denek için tekrarlayın; her deneme için video dosya numarasını kaydetmeyi unutmayın.

Koku hassasiyeti testini gösterdiğimize göre, şimdi koku tercihi testine geçiniz. Koku tercihi testi için, iki küçük değişiklik dışında koku hassasiyeti testi için açıklanan prosedürün aynısını izleyiniz. Birincisi.

Önceden seçilmiş tek bir kokunun birden fazla seyreltisini hazırlamak yerine, hem çekici hem de itici kokuları hazırlayın. İkinci olarak, test edilecek seyreltiyi kaydetmek yerine, her denemede sırayı rastgele hale getirerek test edilecek değişkenlerin sırasını kaydedin. Deneklerin alıştırılması, körleme yöntemiyle çalışan bir araştırmacının kullanımı, kokunun filtre kağıdına uygulanması ve her denemenin zaman ayarlı video kaydının alınması dahil olmak üzere prosedürdeki diğer tüm adımlar olfaktör test ile aynıdır.

Koku tercihi testi tamamlandığında, koku testlerinin skorlamasına geçiniz. Tüm koku duyarlılığı ve tercihi videoları toplandıktan sonra, deneğin tutarlılık adına her bir dilüsyonu veya kokuyu keşfetmek için harcadığı toplam süreyi skorlayınız. Bu analizi gerçekleştirmek için videoları, çalışmaya kör olan bir araştırmacının analiz etmesini sağlayınız.

Öncelikle videoyu önizlemek ve şunları not etmek faydalıdır: Filtre kağıdının arenaya yerleştirildiği an, farenin filtre kağıdına yaklaştığı an, farenin filtre kağıdını incelediği an ve filtre kağıdının arenaya ilk yerleştirildiği andan itibaren üç dakikanın geçtiği an. Fare davranışına ne zaman odaklanılacağını bilmek, inceleme sırasında toplam keşif süresini doğru bir şekilde puanlamayı kolaylaştırır; şimdi videonun tamamını gözden geçirin. Filtre kağıdının arenaya yerleştirilmesini takip eden üç dakika içindeki tüm inceleme sürelerini ölçmek için bir kronometre kullanın.

İnceleme süresi, farenin burnunun filtre kağıdına olan mesafesinin bir milimetreden daha az olduğu her türlü süre olarak tanımlanır; farenin filtre kağıdına yakın olduğu ancak aktif olarak incelemediği sürelerin dahil edilmemesi önemlidir. Toplam keşif süresine, kağıdı çiğneme ve yalama dönemlerinin yanı sıra kağıdın üzerine oturma dönemlerini dahil etmeyin. Koku alma davranışını doğru bir şekilde analiz etmek için bu kurallara titizlikle ve tutarlı bir şekilde uyun.

Video kaydını gözden geçirerek filtre kağıdının incelenmesine harcanan toplam süreyi belirledikten sonra, analizi tüm videolar için tekrarlayın. Burada koku testlerinden elde edilen temsili sonuçlar yer almaktadır. Bu ilk grafik, bir koku duyarlılığı eğitimi seansının sonuçlarını göstermektedir.

Deneysel grup B veya kontrol grubu A'daki her bir fare, filtre kağıdı üzerindeki beş farklı tarçın ekstraktı dilüsyonundan birine bir kez üç dakikalık bir oturum boyunca maruz bırakılmıştır. Filtre kağıdını keşfetmek için harcanan toplam süre değerlendirilmiş olup bu grafik, bir koku tercihi testi oturumunun sonuçlarını göstermektedir. Her bir fare, filtre kağıdı üzerindeki farklı kokuların her birine bir kez üç dakikalık bir oturum boyunca maruz bırakılmıştır.

Filtre kağıdının keşfi için harcanan toplam süre değerlendirildi. Bu prosedürleri kullanırken yetişkin farelerde koku alma yeteneklerinin nasıl test edileceğini size gösterdik; koku alma yeteneklerini ve öğrenme ile hafıza gibi diğer yetenekleri değil, yalnızca koku alma duyusunu doğru şekilde test etmek için deneyimsiz (naive) fareler kullanmak önemlidir. Hepsi bu kadar.

İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.