Name: تشريح أقراص تخيلي من يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي 3 (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: تعلم تقنية تشريح الأقراص التخيلية من يرقات ذبابة الفاكهة في طور النمو الثالث. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة عمليات التطور والموت الخلوي المبرمج في الأنسجة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ليس لدى المؤلفين أي تضاربات مصالح للإفصاح عنها.

تشريح أقراص تخيلي من يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي 3

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

هذا البروتوكول يوضح تشريح تقنية تستخدم لعزل الأقراص يرقات ذبابة الفاكهة من تخيلي في مرحلة طور مرحلي 3. وأظهرت أساليب لإصلاح الأنسجة بعد ان قال وإزالة الجناح ، الساق ، وأقراص العين مباشرة على شريحة المجهر لرؤية لاحقة.

سأقوم اليوم بشرح كيفية تشريح الأقراص التخيلية من يرقات ذبابة الفاكهة (drosophila) في الطور اليرقي الثالث. يمكن استخدام أقراص الطور اليرقي الثالث في العديد من العمليات النمائية؛ فنحن ندرسها في مختبرنا لمتابعة عملية الموت الخلوي المبرمج (apoptosis)، ولكن يمكنكم أيضاً التعبير عن بروتينات مختلفة فيها ودراستها بهذه الطريقة، ومراقبة كافة أنواع العمليات النمائية التي تحدث داخل هذه الأقراص بالتسلسل.من أجل القيام بذلك، سأستخدم عدة أدوات مهمة للغاية. الأولى هي عصا الالتقاط التي سنستخدمها لإخراج اليرقات من أطباقها. تليها، وبأهمية بالغة، ملاقط التشريح، والتي يجب أن تكون حادة للغاية لضمان سير عملية التشريح بنجاح.بعد ذلك، سنستخدم شفرة جراحية، شفرة جراحية رقم 11، لإزالة الأقراص من الرأس. ثم سنضع الأقراص على شريحة باستخدام vector shield كوسيط تثبيت. لذا، فإن أول شيء سنقوم به هو جمع بعض يرقات third and star wandering.أستخدم هنا عصا الالتقاط الخاصة بي لنزعها من جانب القارورة. أحياناً يكون من المفيد أن تكون العصا مبللة قليلاً، ثم يتم وضع اليرقات في قطرة من PBS. حسناً، لدينا هنا اليرقة الثالثة.بما أنني أستخدم يدي اليمنى، سأقوم بتدوير رأسه نحو اليمين، وسنستخدم بعض العلامات التشريحية لإرشادنا إلى مكان الإمساك به. الأولى هي الجزء الرئيسي من الرغامي هنا وهنا. ثم يوجد مقطع عرضي صغير هنا باتجاه الرأس.أولاً، سأمسك اليرقة برفق عند نقطة تبعد حوالي ثلثي المسافة من الرأس باتجاه الأسفل. ثم سأمسك بيدي اليمنى على بعد بضعة مليمترات خلف القطعة العرضية هنا، محاولاً الوصول إلى منتصف عرض اليرقة تقريباً. وبهذا تكون القبضة جيدة.يمكنكم ملاحظة أنني قد أنجزت حوالي نصف العملية. لذا، سأقوم بالسحب برفق بيدي اليمنى إلى الأمام، وانظروا كيف تخرج جميع الأمعاء هناك. حسناً، يمكن الآن التخلص من الجزء الرئيسي من الجسم.وهنا لدينا الرأس، والذي يتضمن الأقراص التخيلية المرتبطة بأجزاء الفم. لذا سأمسكه من أجزاء الفم حتى لا أسحق أيًا من الأقراص، وأنقله إلى قطرة جديدة من PBS. والآن أصبح لدينا رأس اليرقة المثبت.سنقوم بإزالة جميع الأنسجة الزائدة، ثم إما أن نمسك اليرقة من أجزاء الفم كما فعلنا سابقاً، أو يمكننا ضغطها للأسفل مقابل لوحة التشريح باستخدام الملقط. أجزاء الفم موجودة الآن جهة اليسار. حسناً، لدينا هنا المعي، وهو ما لا نريده، وهناك غدة لعابية.توجد بعض الأجسام الدهنية أو أنسجة دهنية. استمر في إزالتها، خاصة الدهون، التي يمكن أن تتداخل مع بعض المقايسات والصبغ وأي شيء آخر غير مرغوب فيه. الآن أصبح لدينا رأس اليرقة بعد تنظيفه.لدينا الآن رؤوس اليرقات، التي تم فصلها عن الجسم وتشريحها، ثم تثبيتها وغسلها، وإزالة الأنسجة الزائدة منها، وقد عولجت بما يلزم، والذي قد يكون صبغاً بالأجسام المضادة أو C two tunnel أو أي صبغ وظيفي آخر. والآن قمنا بوضعها على شريحة ونحن مستعدون لتشريح الأقراص الفعلية بعيداً عن الرأس، أي أجزاء الفم.حسناً، في هذه المرة تقع أجزاء الفم هنا على اليسار. سأستخدم الملاقط وأضغط بها لأسفل مقابل الشريحة. وفي يدي اليمنى لدي شفرة مشرط رقم 11، وهي أداة أكثر دقة قليلاً، سأستخدمها في عملية التشريح.أولاً، سأقوم بإزالة الجهاز العصبي المركزي والفصوص البصرية. وكما ترون، هنا يوجد الجهاز العصبي المركزي، وهناك الفصان البصريان، وهنا توجد أقراص العين والقرون الاستشعارية المتصلة بهما. لذا، سأقوم بإزالة الجهاز العصبي المركزي عن طريق غرز الشفرة بين الفصوص البصرية وأقراص العين والسحب ببطء، بحيث تتمدد أقراص العين تدريجياً.حسنًا، لدينا هنا الجهاز العصبي المركزي والفصوص البصرية. والآن لدينا قرصا العين اللذان تم فصلهما عن الجهاز العصبي المركزي. سأقوم الآن بفصلهما عن أجزاء الفم عن طريق القطع والسحب برفق من القاعدة.حسنًا، يوجد قرص عين وهوائي واحد، وقرص عين وهوائي آخر. حسنًا. والآن يمكننا رؤية قرص الجناح يبرز هنا. سأقوم، مرة أخرى، بتحديد القاعدة بلطف ثم القطع والسحب.إذًا لدينا هنا قرص جناح وقرص ساق متصل به، إلى جانب جزء صغير من القصبات الهوائية. حسنًا، هذا هو قرص الجناح مع قرص ساق متصل به، ومن الواضح وجود العديد من أقراص السيقان. لذا يمكننا البحث هنا والعثور على المزيد من الأقراص بمجرد السبر برفق باستخدام الشفرة.هذه هي جميع الأقراص التي سنجدها في هذه العينة. هناك بضعة أقراص أرجل إضافية.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن هنا وصف بروتوكول لدراسة الهجرة من الخلايا الدبقية في عين ذبابة الفاكهة النامية باستخدام التحليل المجهري مع الخلايا الحية المقترنة GFP الدبقية المفتاحية.

يعيش التصوير للهجرة الخلايا الدبقية في القرص العين تخيلي ذبابة الفاكهة

وصفنا أحمر فلوري رواية البروتين (RFP) المراسل ان يتم التعبير عن وتحديدا...

مراسل RFP رواية للمساعدة في التصور من القرص في العين تخيلي ذبابة الفاكهة</em

يرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن توفير نظام النموذج المثالي للتحقيق في آليات النقل داخل محواري الأعصاب قطعي اليرقات. باستخدام هذا الإجراء ، يمكن مقارنة 3 اليرقات طور مرحلي الثالثة تحمل طفرات مختلفة ليرقات النوع البري.

تصور الأعصاب القطاعي اليرقات في 3 الثالثة طور مرحلي ذبابة الفاكهة التحضيرات اليرقات

تشريح والمناعية من اليرقات، العذراء وتعليم الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; شبكية العين

عند تلطيخ ذبابة الفاكهة الأقراص الخيالية ، غالبا ما يتم إجراء تشريح تقريبي حيث تتعرض الأقراص ولكنها تظل متصلة بالجسم. بمجرد تلطيخها ، يتم عزل الأقراص ذات الأهمية وتركيبها. يوضح بروتوكول المثال إجراء لتشريح القرص التخيلي للجناح وتركيبه.

ذبابة الفاكهة تشريح القرص الخيالي لليرقة: طريقة لمراقبة الظهارة النامية

هذا البروتوكول تفاصيل طريقة مبسطة تستخدم لإجراء التصوير الخلية الحية في سياق الدماغ اليرقات سليمة. النهج التصوير الخلية الحية لا تقدر بثمن لدراسة الخلايا الجذعية العصبية الانقسامات غير المتماثلة فضلا عن العمليات العصبية والتنموية الأخرى، كشف باستمرار الآليات التي تم تجاهلها سابقا.

التصوير المباشر ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات Neuroblasts

الهياكل البالغة لذبابة الفاكهة مشتقة من هياكل تشبه الكيس تسمى الأقراص الخيالية. يوفر تحليل هذه الأقراص نظرة ثاقبة للعديد من العمليات التنموية بما في ذلك تحديد الأنسجة ، وإنشاء حدود المقصورة ، وتكاثر الخلايا ، ومواصفات مصير الخلية ، وقطبية الخلية المستوية. يستخدم هذا البروتوكول لإعداد أقراص خيالية للفحص المجهري الضوئي / الفلوري.

تشريح والمناعية من تخيلي أقراص من ذبابة الفاكهة السوداء البطن

الهدف من هذه التقنية هو تمكين الباحثين من إجراء تشريح وتلطيخ مناعي وتركيب أقراص عين العذراء من ذبابة الفاكهة السوداء في أي عمر.

تشريح وتركيب<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; العذراء أقراص العين

يوضح هذا البروتوكول كيفية توليد أورام نسيلي ملحوظ fluorescently، الذي يعرف وراثيا في ذبابة الفاكهة أقراص تخيلي antennal (EAD) العين /. فهو يصف كيفية تشريح EAD والدماغ من يرقات العمر الثالث وكيفية معالجتها لتصور وتحديد التغييرات التعبير الجيني وغزو الورم.

ال<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تخيلي ورم القرص نموذج: التصور والكمي للالتعبير الجيني وغزو الورم عن طريق الفسيفساء الوراثية

نصف بروتوكولا لقياس التلامسات بين الخلايا في الطبقات الظهارية المجاورة في الأقراص الخيالية لجناح ذبابة الفاكهة الحية باستخدام نهج قائم على إعادة تكوين GFP.

نظام التعبير المزدوج القائم على تكميل GFP لتقييم ملامسة الخلية الخلوية بوساطة السيتونيمات في الأقراص الخيالية لجناح ذبابة الفاكهة الحية

تصف هذه المقالة بروتوكول تقطيع القرص التخيلي الفعال وتلوين الأجسام المضادة الاقتصادي، وهو اقتصادي مع المواد التفاعلية ويسهل التعامل مع الأقراص التخيلية بأعداد قليلة.

تشريح صغير النطاق وتلوين الأجسام المضادة للأقراص التخيلية للعين والجناح من ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر

تعلم تقنية تشريح الأقراص التخيلية من يرقات ذبابة الفاكهة في طور النمو الثالث. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة عمليات التطور والموت الخلوي المبرمج في الأنسجة.

تشريح أقراص تخيلي من يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي 3

استكشف المزيد من الفيديوهات