Insekten-Puparium-Entfernung: Eine Methode für Pupal-Untersuchung

-Um Zugang zu den sich entwickelnden Pupa zu erhalten, Entfernen Sie das Puparium, nachdem sich das Pupalepithel von der Nagelhaut oder nach der Pupalstufe P5 getrennt hat. Um zu beginnen, legen Sie die intakte Pupilpe mit ihrer ventralen Seite nach Ihnen gerichtet. Verwenden Sie Zangen, um das Puparium an dem leeren Raum zwischen dem vorderen Ende des Gehäuses und dem Kopf der Pupa zu halten.

Unter Beibehaltung der ventralen Ausrichtung verwenden Sie die Zange, um kleine Brüche entlang der vorderen-hinteren Achse des Pupariums zu erzeugen und sicherzustellen, dass dabei eine kontinuierliche Lücke entsteht. Achten Sie darauf, keines der Pupa-Gewebe direkt darunter zu beschädigen. Dann weiter, um das Puparium aus dem Spalt nach außen zu brechen, eine Portion nach der anderen, und verbreiten Sie das zerrissene Gehäuse in den Prozess. Mit einem feinen nassen Pinsel, nehmen Sie die exponierte Pupa für die weitere Untersuchung. Im Beispielprotokoll werden wir sehen, wie das Puparium von Drosophila guttifera zu entfernen und bereiten Sie die Pupa für die Bildgebung.

-Um mit der Entfernung von Puparium zu beginnen, befestigen Sie ein Stück doppelseitiges Klebeband auf einem Blatt Papiertuch. Legen Sie die Pupa auf das doppelseitige Band, die ventrale Seite nach oben. Suchen Sie den Raum zwischen der vorderen Seite des Pupariums und der internen Pupa. Greifen Sie und entfernen Sie das Puparium um diesen Spalt mit Zangen und belichten Sie die vordere Seite des Kopfes der Pupa.

Legen Sie die Spitze einer Zange ein, indem Sie sie parallel zur vorderen-hinteren Achse bewegen. Heben Sie die Spitze der Zange an, um das Puparium lokal zu brechen. Wiederholen Sie diese Aktion, bis der Bruch den hinteren Teil des Pupariums erreicht. Stellen Sie sicher, dass ein Spalt zwischen dem Puparium und den Pupalbeinen gebildet wird, und brechen Sie die ventrale Seite des Pupariums, während Sie die Schäden an der inneren Pupa minimieren. Nachdem Sie das Puparium so weit wie möglich gebrochen haben, nehmen Sie die Pupa mit einem feinen Pinsel heraus. Legen Sie die Pupa auf ein Stück Tissuepapier, das mit ddH2O befeuchtet und in eine Kunststoff-Petrischale gelegt wurde. Nehmen Sie sofort Fotos auf, da die exponierte Pupa verwundbar ist und leicht trocknet.