Fly Climbing Assay: Une méthode pour tester la locomotion générale dans Drosophila melanogaster

-Tout d’abord, obtenir un certain nombre de drosophiles adultes. La chambre d’essai de l’essai d’escalade est composée de deux flacons scotchés ensemble. L’un de ces flacons doit être marqué d’une ligne.

Sans anesthésie au dioxyde de carbone, ce qui peut nuire au comportement d’escalade, transférez un certain nombre de mouches à la chambre d’essai. Laissez les mouches récupérer pendant une période prédéterminée. Avec le côté marqué de la chambre vers le bas, appuyez fermement sur la chambre sur un tapis de souris placé sur une surface solide. Cela forcera les mouches au fond de la chambre. L’essai d’escalade tire parti de la tendance naturelle de Drosophila à monter contre la gravité, un comportement appelé géotaxis négatif.

Au cours de l’essai, les mouches ne devraient pas être exposées à la lumière directe du soleil parce que les mouches peuvent afficher un comportement phototaxis, ou un mouvement en réponse à un stimulus léger. Enregistrez le nombre de mouches qui atteignent ou passent la ligne. Ensuite, obtenez le taux de réussite en pourcentage en divisant ce nombre par le nombre total de mouches testées. Permettre aux mouches de récupérer avant de répéter l’essai. Dans l’exemple, nous observerons un essai de montée à la mouche utilisé pour évaluer la fonction motrice Drosophila après mutagenèse chimique.

-Pour commencer, recueillir des mouches homozygotes à partir de lignées appartenant à la collection mutagenisée de mutants drosophiles de l’ENU cartographiées au deuxième chromosome. Retourner les mouches âgées de 10 à 12 jours dans une chambre d’essai sans anesthésie une ligne à la fois et leur permettre de récupérer pendant cinq minutes.

Avec la ligne de cinq centimètres marquée vers le bas, appuyez de force sur la chambre trois fois sur un tapis de souris placé sur une surface solide afin que toutes les mouches commencent l’essai en bas. Observez la locomotion des mouches sur une période de 10 secondes. Enregistrez le nombre de mouches qui atteignent ou passent la ligne de cinq centimètres dans ce temps ainsi que le nombre total de mouches testées. Attendez une minute avant de commencer un deuxième essai. Répétez un minimum de trois répétitions d’essai par ligne.