Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
-Først, få et bestemt antall voksne Drosophila. Testkammeret for klatreanalysen består av to hetteglass tapet sammen. Et av disse hetteglassene skal merkes med en linje.
Uten karbondioksidbedøvelse, som kan svekke klatreatferd, overføre et sett antall fluer til testkammeret. La fluene komme seg i en forhåndsbestemt tid. Med den markerte siden av kammeret ned, trykk fast på kammeret på en musematte plassert på en solid overflate. Dette vil tvinge fluene til bunnen av kammeret. Klatreanalysen utnytter Drosophilas naturlige tendens til å klatre oppover mot tyngdekraften, en oppførsel som kalles negativ geotaxis.
Under rettssaken bør fluene ikke utsettes for direkte sollys fordi fluene kan vise fototaxis oppførsel, eller bevegelse som svar på lys stimulans. Registrer antall fluer som når eller passerer linjen. Deretter oppnår vi prosenthastigheten ved å dele dette tallet med det totale antall fluer testet. La fluene komme seg før du gjentar studien. I eksemplet vil vi observere en flyklatringsanalyse som brukes til å vurdere Drosophila motorfunksjon etter kjemisk mutagenesis.
-Til å begynne med, samle homozygote fluer fra linjer som tilhører ENU mutagenisert samling av Drosophila mutanter kartlagt til det andre kromosomet. Vend fluene i alderen 10 til 12 dager inn i et testkammer uten anestesi en linje om gangen og la dem komme seg i fem minutter.
Med den fem centimeter lange linjen merket side ned, trykk kammeret tre ganger på en musematte plassert på en solid overflate slik at alle fluer begynner analysen nederst. Observer flue-bevegelse over en periode på 10 sekunder. Registrer antall fluer som når eller passerer fem centimeter-linjen i løpet av denne tiden, samt det totale antallet fluer testet. Vent ett minutt før du starter en ny prøve.
