Zebrafisch-Elektrokardiographie (EKG): Ein minimalinvasiver Assay zur Beurteilung der Herzfunktion

- Legen Sie zunächst eine anästhesierte Fisch-Ventralseite in einen Schlitz in einem nassen Schwamm. Legen Sie die positive Elektrode in die Mittellinie des Fisches auf Höhe der bauchigen Arteriose ein. Als nächstes legen Sie die negative Elektrode unterhalb des Ventrikels und 0,5 bis 1 Millimeter links von der Mittellinie ein, um eine bipolare Leitung zu erzeugen, über die Unterschiede im elektrischen Potential gemessen werden können.

Beginnen Sie mit der Aufnahme, und nach kurzer Zeit, Die P-Welle, die eine vorhoffale Depolarisation darstellt, muss positiv sein. Die Nettosumme der Q-, R- und S-Wellen, die die ventrikuläre Depolarisation darstellt, muss positiv sein. Und schließlich muss die T-Welle, die eine vorgerichtliche Repolarisation darstellt, positiv sein.

Nach der Aufnahme wecken Sie die Fische, indem Sie sie in sauerstoffhaltiges Wasser tauchen und Wasser über die Kiemen spritzen, bis sich die Kiemen oder die Fische regelmäßig zu bewegen beginnen. Im Beispiel führen wir Oberflächenelektrokardiographie an einem erwachsenen Zebrafisch durch.

- Am Tag des Experiments, Den Zebrafisch aus dem Aquarium ins Labor transportieren. Um das In-vivo-EKG-Aufzeichnungssystem einzurichten, verbinden Sie die wesentlichen Geräte und legen Sie die drei farbcodierten Edelstahlelektroden des EKG-Led in die drei farblich abgestimmten Zugangsportale des Verstärkers ein. Zur Induktion der Anästhesie der Stufe 4 tauchen Sie einen erwachsenen Zebrafisch in eine Schale ein, die eine Lösung von Anästhesien bei den niedrigsten vorgegebenen Konzentrationen enthält.

Sobald der Zebrafisch den Pegel für die Anästhesie für drei Sekunden gehalten hat, verwenden Sie ein Paar stumpfe Zangen, um den Fisch sofort auf einen feuchten Schwamm mit einer Schlitz-Ventraloberfläche für die Platzierung der drei EKG-Elektroden zu übertragen.

Positionieren Sie die negative Elektrode kauarisch und 0,5 bis 1 Millimeter seitlich links zur positiven Elektrode in einem Abstand, der größer ist als die maximale apikal-basale Länge des erwachsenen Zebrafischventrikels. Positionieren Sie dann die Referenzelektrode kauadt in der Nähe des Analbereichs. Starten Sie für die EKG-Aufnahme das System und öffnen Sie das EKG-Datenerfassungsprogramm. Wählen Sie die gewünschte Einstellung aus den Dropdown-Menüs für Reichweite, Tiefpass und Höhenpass aus.

Drücken Sie Start, um eine kontinuierliche lückenlose EKG-Aufnahme mit einer Abtastrate von 1 Kilohertz zu initiieren. Um die Bleipositionierung für ein maximales Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren, drücken Sie Stopp, um die Aufzeichnung zu stoppen und die Spur kurz nach dem allerersten Aufnahmeversuch für jedes Herz zu überprüfen. Wenn erwartet wird, dass das EKG normal ist, bestätigen Sie, dass alle EKG-Wellenformen deutlich und gut sichtbar sind und dass die P-Welle, der Netto-QRS-Komplex und die T-Welle alle positiv sind.

- Der wichtigste Schritt ist die Bleipositionierung, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu maximieren. Wenden Sie alle vier Validierungskriterien nach dem allerersten EKG-Aufnahmeversuch für jeden Fisch an, um korrektes Feedback zu erhalten.

- Wenn ein normales EKG erwartet wird, positionieren Sie die Elektroden nach Bedarf neu, bis alle diese vier Validierungskriterien erfüllt sind. Wenn eine normale T-Welle erwartet wird, aber die T-Welle zu klein ist, positionieren Sie die Elektroden neu, um die T-Wellenamplitude zu maximieren. Setzen Sie die EKG-Aufnahme nach der Optimierung der Bleipositionierung fort und speichern Sie die EKG-Sweeps für die nachfolgende Analyse.

Am Ende der EKG-Aufnahmesitzung entfernen Sie vorsichtig die Elektroden, ohne die Fische zu verletzen. In Überlebensstudien übertragen Sie die Fische in frisches, sauerstoffreiches Fischwasser ohne Tricain. Bitte beachten Sie, dass in diesem Video, um den Lesern die Erholung der Fische aus der Anästhesie zu erleichtern, die Sauerstoffversorgung eingestellt wird.

Um die Erholung von der Anästhesie in Überlebensstudien zu erleichtern, verwenden Sie eine Pasteur Pipette, um kräftig Wasser über die Kiemen zu spritzen, bis die Fische wieder regelmäßige Kiemenbewegung oder Schwimmen. Dann überwachen Sie die Fische für die vollständige Erholung von der Anästhesie vor der Rückkehr der Fische in das Aquarium. Der Fisch gilt als vollständig aus der Anästhesie erholt, wenn er für mindestens 5 Sekunden aufrecht schwimmen kann.