Electrocardiografía de pez cebra (ECG): un ensayo mínimamente invasivo para evaluar la función cardíaca

- Para empezar, Colocar un lado ventral de pescado anestesiado hacia arriba en una hendidura en una esponja húmeda. Inserte el electrodo positivo en la línea media del pez a la altura de la arteriosis bulbosa. A continuación, inserte el electrodo negativo debajo del ventrículo y de 0,5 a 1 milímetro a la izquierda de la línea media para crear un plomo bipolar a través del cual se puedan medir las diferencias en el potencial eléctrico.

Comience a grabar, y después de un corto período de tiempo, revisar el rastro para asegurarse de que se cumplen cuatro criterios. Todas las formas de onda deben ser visibles y distintas entre sí. La onda P, que representa la despolarización auricular, debe ser positiva.

Después de la grabación, despierte a los peces sumergiéndolo en agua oxigenada y chorros de agua sobre las branquias hasta que las branquias o los peces comiencen a moverse regularmente.

- El día del experimento, transporte el pez cebra desde el acuario hasta el laboratorio. Para configurar el sistema de grabación ECG in vivo, conecte las piezas esenciales del equipo e inserte los tres electrodos de acero inoxidable codificados por colores del cable ECG en los tres portales de acceso a color del amplificador. Para la inducción de anestesia de nivel 4, sumerja un pez cebra adulto en un plato que contenga una solución de anestésicos en las concentraciones predeterminadas más bajas aprobadas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso animal.

Una vez que el pez cebra haya mantenido el nivel de anestesia durante tres segundos, utilice un par de fórceps contundentes para transferir inmediatamente el pez a una esponja húmeda con una superficie ventral cortada para la colocación de los tres electrodos ECG. Introduzca suavemente el electrodo positivo en la línea media ventral a nivel de la arteriosis bulbosa de 1 a 2 milímetros por encima de una línea imaginaria que conecte los dos bordes inferiores de los operculums.

Coloque el electrodo negativo caudalmente y 0,5 a 1 milímetro a la izquierda lateralmente en el electrodo positivo a una distancia mayor que la longitud apical-basal máxima del ventrículo adulto del pez cebra.

Pulse Iniciar para iniciar la grabación continua de ECG sin huecos a una velocidad de muestreo de 1 kilohercio. Para optimizar el posicionamiento del plomo para la relación señal máxima a ruido, pulse stop para detener la grabación y revise el rastro poco después del primer intento de grabación para cada corazón. Si se espera que el ECG sea normal, confirme que todas las formas de onda ECG son distintas y fácilmente visibles y que la onda P, el complejo QRS neto y la onda T son todos positivos.

- El paso más crítico es el posicionamiento del plomo para maximizar la relación señal-ruido.

- Si se espera un ECG normal, reposicione los electrodos según sea necesario hasta que se cumplan todos estos cuatro criterios de validación. Si se espera una onda T normal pero la onda T es demasiado pequeña, vuelva a colocar los electrodos para maximizar la amplitud de la onda T. Reanude la grabación de ECG después de optimizar el posicionamiento del cable guardando los barridos de ECG para su posterior análisis.

Al final de la sesión de grabación del ECG, retire cuidadosamente los electrodos sin dañar al pez. En estudios de supervivencia, transfiera el pescado a agua de pescado fresca y oxigenada libre de tricarina.

Para facilitar la recuperación de la anestesia en los estudios de supervivencia, utilice una pipeta Pasteur para chorros vigorosos de agua sobre las branquias hasta que el pez reanude el movimiento regular de las branquias o la natación.