Saggio dell'isola: un metodo ad alta produttività per valutare il comportamento locomotore della Drosophila

- Il saggio dell'isola è costituito da una piattaforma bianca rialzata in un vassoio di acqua sapona, coperta da una scatola trasparente con un lato aperto. Una telecamera sopra la scatola registra le immagini aeree della piattaforma e le luci sono posizionate per garantire un'illuminazione uniforme dell'area.

Per caricare le mosche sull'arena, toccare una fiala contro una superficie piana per portare tutte le mosche sul fondo. In rapida successione, rimuovere la spina del flaconcino, capovoltare il flaconcino e toccare l'estremità aperta del flaconcino sulla piattaforma per far cadere tutte le mosche contemporaneamente. Atterrare sulla piattaforma innesca una risposta di fuga. Le mosche con mobilità tipica possono cancellare la piattaforma in pochi secondi, a differenza di quelle con difetti locomotori.

I soggetti sono confinati nella scatola e quelli che atterrano sull'acqua sapona si sommergeno rapidamente perché il sapone diminuisce la tensione superficiale dell'acqua. Per valutare il comportamento locomotore da diverse condizioni, contare le mosche rimanenti sulla piattaforma dopo un determinato periodo di tempo.

In questo protocollo di esempio, vedremo una configurazione del test dell'isola compatibile con l'analisi semi-automatizzata delle immagini.

- In primo luogo, preparare almeno tre fiale per condizione sperimentale come repliche biologiche. Ogni flaconcino deve contenere circa 15 mosche dello stesso sesso e di età simile. È importante sottolineare che le mosche devono avere ali intatte.

Creare le cartelle in cui archiviare gli esperimenti. Generarli in una struttura di directory definita dalle condizioni e dalle repliche. Se, ad esempio, l'esperimento dispone di due genotipi con cinque repliche ciascuno, creare una cartella principale con la data dell'esperimento e, all'interno di tale cartella, creare una sottocartella per ogni genotipo. Quindi, all'interno delle cartelle genotipo, creare sottocartelle per ogni replica.

Successivamente, impostare l'apparato di prova. Aggiungere acqua fredda con una piccola quantità di sapone sul vassoio del bagno e posizionare la piattaforma al centro del bagno, se non già fissata nella vasca da bagno. Coprire il vassoio e la piattaforma con una scatola trasparente.

Per illuminare la piattaforma, posizionare una lampada fredda, come i normali LED a 12 volt, sopra di essa. Inoltre, posizionare una webcam collegata a un computer direttamente sopra la piattaforma.

Nel computer aprire il software di registrazione delle immagini. Dal sistema Menu selezionare la webcam appropriata come dispositivo di acquisizione. Posizionare una mosca morta sull'isola per regolare le impostazioni video. Modificare la luminosità, il contrasto e il colore nel software in modo che la mosca morta appaia nera su uno sfondo bianco.

Quindi, regolate la configurazione del filmato time lapse per salvare i filmati come file AVI. Quindi, accedete alla directory in cui i dati devono essere salvati e definite il nome del filmato. Salvate queste modifiche. Salvate queste modifiche.

Per la compressione dei dati dell'immagine, scegliete il codice Intel IYUV. Impostate la velocità di registrazione su un fotogramma ogni 0,1 secondi e regolate la velocità di riproduzione corrispondente su 10 immagini al secondo.

Infine, passare all'impostazione Avanzate e selezionare Crea un'immagine BNP per ogni fotogramma acquisito. Passare quindi alla stessa directory scelta per ospitare i file AVI e premere OK.

Prima di iniziare, assicurarsi che l'isola sia vuota e pulita. Avviare la registrazione nell'interfaccia dell'immagine time lapse del software di registrazione delle immagini.

Prendete una fiala contenente mosche e toccatela due o tre volte per far cadere tutte le mosche verso il basso. Quindi, rimuovere rapidamente la spina dal flaconcino e toccare vigorosamente le mosche sulla piattaforma. Dovrebbero colpire tutte la piattaforma all'incirca nello stesso momento.

Concedere alle mosche fino a 30 secondi per uscire dalla piattaforma. Arrestare la registrazione. Se necessario, rimuovere manualmente le mosche rimanenti dalla piattaforma.

Prima di procedere all'esperimento successivo, assicurati di ridefinire la directory in cui deve essere archiviato il set di dati successivo.