島のアッセイ: ショウジョウバエ ・ロコ運動行動を評価するハイスループット法

- 島のアッセイは、石鹸水のトレイに盛り上がった白いプラットフォームで構成され、1つのオープンサイドを持つ透明なボックスで覆われています。

アリーナにハエをロードするには、平らな面にバイアルをタップしてすべてのハエを底に持ち込みます。素早く行きましてバイアルプラグを取り外し、バイアルプラグを外し、バイアルのオープンエンドをプラットフォームにタップして、同時にすべてのハエをノックアウトします。

被験者は箱に閉じ込められ、石鹸の表面張力が低下するので石鹸水に着陸したものはすぐに水没する。異なる条件から運動行動を評価するには、設定された期間の後にプラットフォーム上の残りのハエを数える。

このプロトコル例では、半自動画像解析と互換性のある島のアッセイの設定が見られます。

- まず、生物学的複製として実験条件ごとに少なくとも3つのバイアルを準備します。各バイアルには、同じ性別と同じような年齢の約15匹のハエが含まれている必要があります。

実験を保存するフォルダを作成する.条件と複製で定義されたディレクトリ構造でこれらを生成する。例えば、実験にそれぞれ5つの複製を持つ2つの遺伝子型がある場合、実験の日付を持つメインフォルダを作成し、そのフォルダ内に各遺伝子型のサブフォルダを作成します。

次に、テスト装置を設置します。少量の石鹸を入れた冷たい水を浴槽に入れ、お風呂の真ん中に設置します。

プラットフォームを照らすには、通常の12ボルトLEDなどのクールなランプを上に置きます。

コンピュータで画像記録ソフトウェアを開きます。メニューシステムから適切なウェブカメラをキャプチャデバイスとして選択します。

次に、ムービーを AVIファイルとして保存するために、タイムラプスムービーの設定を調整します。

イメージデータの圧縮のために、インテルIYUVコードを選択します。 0.1 秒ごとに 1つのフレームに録音速度を設定し、対応する再生レートを1 秒あたり 10 のイメージに調整します。

最後に、[詳細設定]設定に移動し、[キャプチャされたフレームごとに BNP イメージを作成する] を選択します。

始める前に、島が空できれいであることを確認してください。次に、画像記録ソフトウェアのタイムラプス画像インターフェイスで記録を開始してください。

ハエを含むバイアルを取り、それを2〜3回タップしてすべてのハエを底まで倒す。その後、素早くバイアルからプラグを取り外し、ハエをプラットフォームに激しくタップします。

ハエにプラットフォームを離れるまで30秒まで与え、それから、録音を停止します。

次の実験に進む前に、次のデータセットが格納されるディレクトリを再定義してください。