Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Start med at cohousing et bestemt antal mandlige og kvindelige Drosophila melanogaster frugt fluer i et hætteglas, der indeholder majsmel medium. Dette giver mulighed for en konsekvent tæthed af afkom.
Lad de kvindelige fluer lægge æg. Fjern derefter de voksne fluer. Æggene bliver larver, pupper og endelig voksne fluer i et spænd på 10 dage. Nye fluer, der dukker op tidligere end deres kohorte, skal fjernes før dag 9. Del de nu synkroniserede fluer i grupper til kontrol og eksperimentelle forhold. Cohousing mandlige og kvindelige fluer tillader parring og fjerner en variabel, der påvirker levetiden.
Efter flere dage skal du adskille fluerne efter køn i grupper. Placer et lige antal fluer i den tilsvarende eksperimentelle tilstand. Hver tredje dag overføres de levende fluer til et nyt hætteglas og registrerer antallet af døde fluer. Gentag denne proces, indtil alle fluerne er døde.
Efter mindst tre replikerede eksperimenter skal du plotte den gennemsnitlige procentdel af overlevende fluer om dagen for at generere gennemsnitlige overlevelseskurver for hver tilstand. I dette eksempel vil vi se, hvordan vi genererer overlevelseskurver for kohorter behandlet med hormonforstyrrende kemikalier.
- I levetidsprotokollen skal du først oprette 20 hætteglas med otte kvinder og fire mænd, hver fyldt med 10 milliliter majsmel mad, og huse dem ved 25 grader Celsius. Efter fire dage, kassér fluerne og læg hætteglassene tilbage i inkubatoren.
Efter 16 til 24 timer skal du dividere med 250 endags gamle voksne fluer af begge køn i fire grupper under let kuldioxidbedøvelse og overføre dem til 250 milliliter flasker indeholdende voksen medium mad, tre suppleret med forskellige EDC-koncentrationer og en med EE2-opløsningsmidlet alene. hvor antallet af døde fluer trækkes fra antallet af overlevende fluer fra den foregående overførsel, således at antallet af overlevende ved hver overførsel automatisk opnås.
Efter tre dage overføres fluerne uden anæstesi til nye hætteglas, der indeholder den tilsvarende mad på samme tid og kontroller for døden. Registrer fluernes alder og antallet af døde fluer. Gentag overførslen hver tredje dag, indtil alle fluerne dør.
