Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Beginnen Sie mit der Kohousing einer festgelegten Anzahl von männlichen und weiblichen Drosophila melanogaster Fruchtfliegen in einer Durchstechflasche mit Maismehlmedium. Dies ermöglicht eine konsistente Dichte der Nachkommen.
Lassen Sie die weiblichen Fliegen Eier legen. Dann entfernen Sie die erwachsenen Fliegen. Die Eier werden zu Larven, Pupae, und schließlich erwachsene Fliegen in einer Spanne von 10 Tagen. Neue Fliegen, die früher als ihre Kohorte entstehen, sollten vor Tag 9 entfernt werden. Teilen Sie die jetzt synchronisierten Fliegen in Gruppen für die Kontrolle und experimentelle Bedingungen. Cohousing männliche und weibliche Fliegen ermöglicht paaren, Entfernen einer Variable, die die Lebensdauer beeinflusst.
Nach einigen Tagen trennen Sie die Fliegen nach Geschlecht in Gruppen. Legen Sie eine gleiche Anzahl von Fliegen in den entsprechenden versuchslichen Zustand. Alle drei Tage übertragen Sie die lebenden Fliegen in eine neue Durchstechflasche und erfassen Sie die Anzahl der toten Fliegen. Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis alle Fliegen gestorben sind.
Zeichnen Sie nach mindestens drei Replikationsexperimenten den durchschnittlichen Prozentsatz der überlebenden Fliegen pro Tag auf, um mittlere Überlebenskurven für jede Bedingung zu erzeugen. In diesem Beispiel werden wir sehen, wie Überlebenskurven für Kohorten generiert werden, die mit endokrine störenden Chemikalien behandelt werden.
- Im Life-Time-Protokoll, stellen Sie zunächst 20 Fläschchen mit acht Weibchen und vier Männchen, jeweils gefüllt mit 10 Milliliter Maismehl Nahrung, und beherbergen sie bei 25 Grad Celsius. Nach vier Tagen, entsorgen Sie die Fliegen und legen Sie die Fläschchen zurück in den Brutkasten. Am späten Nachmittag des 9. Tag, entfernen Sie alle neu entstandenen Fliegen aus den Fläschchen und kehren Sie die Fläschchen zum Brutkasten zurück.
Nach 16 bis 24 Stunden bei 250 eintägigen erwachsenen Fliegen beiderlei Geschlechts in vier Gruppen unter leichter Kohlendioxidanästhesisierung aufteilen und in 250 Milliliter-Flaschen mit mittelschweren Lebensmitteln für Erwachsene übertragen, drei ergänzt mit verschiedenen EDC-Konzentrationen, und eine mit dem EE2-Lösungsmittel allein. Halten Sie die Fliegen bei 25 Grad Celsius für zwei bis drei Tage, damit sie sich paaren. Dann sortieren Sie jede Kohorte von Fliegen nach Geschlecht in zwei Gruppen. Innerhalb jeder Behandlungsbedingung für beide Geschlechter, nach dem Zufallsprinzip unterteilen jede Gruppe in fünf parallele Fläschchen mit einer Dichte von 20 Personen pro Durchstechflasche. Bereiten Sie eine Lebensdauer Tabelle in dem die Anzahl der toten Fliegen von der Anzahl der überlebenden Fliegen von der vorherigen Übertragung abgezogen wird, so dass die Anzahl der Überlebenden bei jedem Transfer automatisch ermittelt wird.
Nach drei Tagen die Fliegen ohne Anästhesie auf neue Fläschchen mit dem entsprechenden Futter zur gleichen Zeit übertragen und auf den Tod überprüfen. Erfassen Sie das Alter der Fliegen und die Anzahl der toten Fliegen. Wiederholen Sie den Transfer alle drei Tage, bis alle Fliegen sterben.
