Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begynn med å cohousing et bestemt antall mannlige og kvinnelige Drosophila melanogaster fruktfluer i et hetteglass som inneholder maismel medium. Dette gir en konsekvent tetthet av avkom.
La de kvinnelige fluene legge egg. Fjern deretter de voksne fluene. Eggene blir larver, pupper, og til slutt flyr voksne i løpet av 10 dager. Nye fluer som dukker opp tidligere enn kohorten, bør fjernes før dag 9. Del de nå synkroniserte fluene i grupper for kontroll og eksperimentelle forhold.
Etter flere dager, del fluene etter kjønn i grupper. Plasser like mange fluer i tilsvarende eksperimentell tilstand. Hver tredje dag overfører du de levende fluene til et nytt hetteglass og registrerer antall døde fluer. Gjenta denne prosessen til alle fluene er døde.
Etter minst tre replikeringsforsøk, plott den gjennomsnittlige prosentandelen av overlevende fluer om dagen for å generere gjennomsnittlige overlevelseskurver for hver tilstand. I dette eksemplet vil vi se hvordan vi genererer overlevelseskurver for kohorter behandlet med endokrine forstyrrende kjemikalier.
- I levetidsprotokollen, først satt opp 20 hetteglass med åtte kvinner og fire menn, hver fylt med 10 milliliter maismel mat, og hus dem på 25 grader Celsius. Etter fire dager, kast fluene og legg hetteglassene tilbake i inkubatoren. På sen ettermiddag på dag 9, fjern alle nyoppdagede fluer fra hetteglassene og returner hetteglassene tilbake i inkubatoren.
Etter 16 til 24 timer, del på 250 en dag gamle voksne fluer av begge kjønn i fire grupper under lett karbondioksidbedøvelse og overfør dem til 250 milliliterflasker som inneholder voksen middels mat, tre supplert med forskjellige EDC-konsentrasjoner, og en med EE2-løsningsmidlet alene. Opprettholde fluene ved 25 grader Celsius i to til tre dager for å la dem parre seg. Sorter deretter hver kohort av fluer etter kjønn i to grupper. Innenfor hver behandlingsbetingelse for begge kjønn, del tilfeldig hver gruppe i fem parallelle hetteglass med en tetthet på 20 personer per hetteglass. hvor antall døde fluer trekkes fra antall overlevende fluer fra forrige overføring, slik at antall overlevende ved hver overføring automatisk oppnås.
Etter tre dager, overfør fluene uten anestesi til nye hetteglass som inneholder tilsvarende mat samtidig og se etter død. Registrer fluenes alder og antall døde fluer. Gjenta overføringen hver tredje dag til alle fluene dør.
