Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- התחל על ידי הרכבה נקייה, זחל מורדם תחת כיסוי זכוכית להחליק עם ראשו למעלה. הבא, לחשוף את אזור העניין על ידי בעדינות דוחף את החלקה לכסות לגלגל את הזחל ולהתאים את מיקומו.
לאחר מכן לחשוף את האקסון היעד לייזר שני פוטון בעוצמה גבוהה יותר מאשר משמש להדמיה כדי לגרום נזק. לייזר שני פוטון משמש בשל יכולתו לחדור במדויק לוקליזציה נזק בתוך רקמה חיה עם נזק מינימלי לרקמות שמסביב.
לעצור את החשיפה לייזר מיד כאשר יש נזק לנוירון היעד, וכתוצאה מכך אקסוטומיה, או ניתוק של האקסון.
בפרוטוקול הדוגמה, נעלה זחל למיקרוסקופיה, נגרום נזק לנוירונים חושיים בזחל, ונעקוב אחר התחדשות עצבית.
- התחילו בהרדמת הזחלים.
לאחר מכן, על מגלשת זכוכית מקום טיפה אחת של שמן halocarbon 27 במרכז, ומניחים נקודה של שומן ואקום על כל אחת מארבע הפינות.
לאחר מכן, השתמש בכוח עדין כדי להחליק את החלקת המכסה כדי לגלגל את התאים למקום שבו לייזר שני פוטון יפגע בהם בקלות רבה. המיקום ישתנה בהתאם לתבני העצבים הממוקדים.
בתוכנה, עבור למצב הסריקה וטען את הפרוטוקול שנשמר.
לאחר מכן, הפסק את הסריקה החיה כך שלחצן החיתוך יהפוך לזמין.
לאחר מכן, חזור לחלון ההדמיה המקורי ובחר את המצב החי, ומצא את האזור שהיה מיועד זה עתה על-ידי התאמת המוקד.
- אינדיקציה טובה לפציעה מוצלחת היא הופעת מכתש קטן, מבנה דמוי טבעת או פסולת מקומית ממש באתר הפציעה.
- עכשיו בזהירות להסיר את החלקת הכיסוי, ולהעביר את הזחל הפצוע על צלחת חדשה עם משחת שמרים.
להדמיה הבאה של הזחל, לעשות שימוש ההתקנה confocal נשמר ולאסוף תמונות מחסנית z עם מטרה 25x. הקפד לכלול את נקודת הנורמליזציה כך התחדשות ניתן לכמת.
