Encyclopedia of Experiments: Biology
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-まず、固定サンプルを脱水乾燥して、従来の走査型電子顕微鏡の操作圧力の低下でガスや液体水を除去することによって生じるサンプル歪みを低減します。
サンプルを脱水するには、エタノールが100%に達するまでエタノール濃度を高めて洗浄し、純粋な乾燥剤でサンプルを洗浄するまでエタノール中の化学乾燥剤でこのプロセスを繰り返します。
次に、カーボン粘着テープを使用して、準備したサンプルを顕微鏡スタブの上に取り付けます。
本実験では、フルーツハエ、ショウジョウバエメラノガスター、乾燥剤HMDSを用いたSEM分析用に調製される。
-ショウジョウバエメラノガスターを準備するには、麻酔付きハエを摂氏4度で2時間固定して1ミリリットルに浸し、完全に水没していることを確認します。
ガラスピペットを使用して固定を取り除きます。固定されたショウジョウバエサンプルを1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離チューブで1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離チューブで3回洗浄し、1ミリリットルの0.1リン酸モルバッファー pH 7.2を室温で10分間洗浄します。
次に、サンプルをマイクロフュージチューブで脱水し、1ミリリットルの体積で、それぞれ10分間グレードエタノールシリーズを使用します。ガラスピペットを使用して各洗浄を取り除き、サンプルを取り除かないように注意してください。
HMDSを用いてハエの化学乾燥を行う場合は、まず、100%エタノール溶液をHMDSの1~2溶液に置き換え、20分間100%エタノールを20分間交換します。
1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離チューブとHMDSに入ったサンプルを使い捨てのアルミニウム計量皿に移します。
ショウジョウバエラベルをアルミニウム取り付けスタブの底に取り付けるには、精密ピンセットを使用して、解剖顕微鏡の下でスタブの上部に固定されたカーボン接着剤タブの所望の位置に乾燥ハエを配置します。
爪楊枝を使って銀色の塗料をハエに接続し、導電性を確保し、塗料が目的のイメージング領域に触れないようにします。
