Химическая сушка: Биологическая подготовка образца для сканирования электронной микроскопии (SEM)

- Для начала начните с обезвоживания и сушки фиксированного образца, чтобы уменьшить искажение образца, вызванное удалением газов и жидкой воды при пониженном операционном давлении обычных сканирующих электронных микроскопов, SEM.

Чтобы обезвоживать образец, промойте его с увеличением концентрации этанола в воде до 100% этанола. Затем повторите этот процесс с химическим сушилым агентом в этаноле до тех пор, пока образец не будет промыт чистым сухим агентом. Перенесите образец и сушильный агент в испаряющейся тарелке.

Далее, смонтировать подготовленный образец на верхней части микроскопа заглушки с использованием углеродной клейкой лентой. Наконец, применить серебряную краску к краям заглушки, а затем от края заглушки к каждому из образцов, чтобы уменьшить накопление избыточных электронов, что может привести к нежелательным артефактов изображения.

В этом эксперименте, плодовые мухи, Drosophila меланогастер, подготовлены для анализа SEM с использованием сушки агента HMDS.

- Для подготовки Drosophila меланогастер, погрузить анестезировал мух в 1 миллилитр фикситивных в течение 2 часов при 4 градусах по Цельсию, убедившись, что они полностью погружены.

Используйте стеклянную пипетку, чтобы удалить fixitive. Вымойте фиксированный образец drosophila в 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки три раза с 1 миллилитров 0,1 молярного фосфата буфер рН 7,2 при комнатной температуре в течение 10 минут. Используйте стеклянную пипетку, чтобы удалить каждую стирку, будучи осторожным, чтобы не удалить образец.

Затем обезвоживают образец в трубке микротекута, в объеме 1 миллилитр, используя градуированный этанол серии в течение 10 минут каждый. Используйте стеклянную пипетку, чтобы удалить каждую стирку, будьте осторожны, чтобы не удалить образец. Держите образец в 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки с достаточно 100% этанола, чтобы покрыть его.

Для выполнения химической сушки мух с помощью HMDS, во-первых, заменить 100% этанола раствор с 1 до 2 раствор HMDS и 100% этанола в течение 20 минут. Затем заменить раствор с 2 к 1 раствор HMDS и 100% этанола в течение 20 минут. Наконец, заменить это решение 100% HMDS в течение 20 минут, а затем повторить процесс один раз.

Передача образца, который находится в 1,5 миллилитровой микроцентрифуге трубки и HMDS, в одноразовый алюминий весом блюдо. Заменить 100% HMDS с достаточно свежих 100% HMDS для покрытия образца. Поместите образец в алюминиевой тарелке непосредственно в химический капот дыма, чтобы высохнуть с свободной крышкой, например, коробка, чтобы предотвратить мусор от падения на образец, и дайте ему высохнуть в течение 12 до 24 часов.

Чтобы смонтировать Drosophila этикетку нижней части алюминия монтажа заглушки. Используйте точность пинцетом, чтобы поместить сушеные мухи в нужном положении на углеродной клей вкладке обеспеченных в верхней части заглушки под рассечением микроскопа. Применение серебра проводящий клей по внешним краям стаббса.

Используйте зубочистку, чтобы соединить серебряную краску с мухами, обеспечивая проводимость, убедившись, что краска не касается желаемой области изображения. Поместите заглушки в ящик держателя заглушки. А затем поместите открытую коробку держателя заглушки в децикатор и дайте серебряной краске высохнуть в течение по крайней мере трех часов.