L’essai CApillary FEeder (CAFE) : Une méthode pour suivre la consommation alimentaire et la préférence à Drosophila

- Pour se préparer à la mangeoire capillaire, ou essai CAFE, insérez des capillaires en verre classés ou marqués remplis d’aliments colorés et liquides, bas de gamme d’abord, à travers les pointes de pipette au-dessus d’un flacon expérimental préassemblé. Assurez-vous que les capillaires sont solidement placés à la même hauteur et ne sont pas en contact avec l’appareil.

Marquer le niveau de départ du ménisque dans chaque capillaire. Ensuite, abritez les flacons dans un environnement à température, humidité et contrôle de la lumière pendant toute la durée de l’expérience tout en remplaçant les capillaires au besoin. Pendant l’analyse CAFE, les mouches mobiles sont libres et ont libre accès à l’extrémité inférieure ouverte de la micropipette. Les mouches se nourrissent volontairement pendant qu’elles prolongent leur proboscis et ingestionnt le liquide, réduisant le milieu à l’intérieur du capillaire.

Pour suivre la consommation alimentaire et la préférence pour une période déterminée, enregistrez la descente du ménisque de la marque de départ au niveau à la fin de cette période à partir de capillaires admissibles. Dans le protocole d’exemple, nous verrons le test CAFE avec l’assemblage modifié pour parvenir à une évaporation réduite des capillaires remplis de liquide.

- Retirez soigneusement la pointe pipette qui ferme l’une des ouvertures extérieures et insérez d’abord un capillaire en verre rempli, extrémité inférieure. Sécurisez le capillaire en plaçant la pointe de la pipette à côté du capillaire. Répétez cette étape pour toutes les solutions alimentaires testées.

Ensuite, placez les extrémités capillaires à l’intérieur de tous les flacons au même niveau, à 3 à 4 centimètres du couvercle. Laissez une certaine distance entre le papier filtre pour empêcher le capillaire de fuir. Utilisez un stylo marqueur pour étiqueter l’extrémité supérieure du liquide coloré. Étiquetez-les individuellement à l’aide d’un code de bande pour s’assurer que les différents capillaires peuvent être identifiés.

Placez les analyses CAFE préparées dans une boîte en plastique avec une incrustation quadrillée. Utilisez une bouse d’éponge pour appliquer 100 microlitres d’eau douce toutes les 24 heures pour maintenir l’humidité constante à l’intérieur de l’essai. Utilisez quatre flacons distincts remplis de 30 millilitres de H2O à double distillation comme dispositifs d’humidité, et placez-les à côté des analyses CAFE dans la boîte en plastique.

Couvrez la boîte en plastique pour créer un environnement contrôlé par l’humidité pendant l’expérience. Transférez la boîte à une position sûre dans une chambre climatique contrôlée par la température, la lumière et l’humidité pour la période expérimentale. Avant chaque intervalle de 24 heures, notez les mouches mortes et utilisez le nombre de mouches vivantes pour calculer la consommation par mouche pendant la période suivante.

À la fin de l’analyse et avant de remplacer le capillaire, gardez l’essai CAFE en position verticale. N’enlevez pas le couvercle et marquez le ménisque inférieur du capillaire. Jetez les données si l’extrémité de la marque n’est pas inférieure à la marque initiale. Remplacez les capillaires usés par des capillaires fraîchement remplis pour des expériences à long terme toutes les 24 heures.

Mesurer le déclin du ménisque. Puis jeter les anciens capillaires. Puis retirer soigneusement les capillaires de l’analyse et les stocker pour la collecte de données. Vérifiez si le liquide à l’intérieur du capillaire a atteint l’extrémité inférieure. Si le liquide à l’intérieur du capillaire n’a pas atteint l’extrémité inférieure, jetez les données.

Après l’expérience, démonter la configuration et laver les flacons, les couvercles et les bouses d’éponge dans un bain de savon. Puis les sécher toute la nuit à température ambiante pour une utilisation plus précise. Répéter les expériences avec les mêmes génotypes sur au moins trois jours différents. À l’aide d’un étrier, mesurer la distance entre le point-début et la marque-fin sur le capillaire. Enfin, jeter les capillaires après la mesure.