CApillary FEeder (CAFE) Analys: En metod för att spåra matkonsumtion och preferens i Drosophila

- För att förbereda för kapillärmataren, eller CAFE-analysen, sätt i graderade eller märkta glaskapillärer fyllda med färgad, flytande mat, botten först, genom pipettspetsarna ovanpå en förmonterad experimentell injektionsflaska.

Markera meniskens startnivå i varje kapillär.

För att spåra matkonsumtion och preferens för en viss tidsperiod, registrera meniskens nedstigning från startmärket till nivån i slutet av den perioden från kvalificerande kapillärer. I exempelprotokollet kommer vi att se CAFE-analysen med enheten modifierad för att uppnå minskad avdunstning från de vätskefyllda kapillärerna.

- Ta försiktigt bort pipettspetsen som stänger en av de yttre öppningarna och sätt in en fylld glas kapillär, botten änden först. Säkra kapillären genom att placera pipettspetsen tillbaka bredvid kapillären.

Placera sedan kapillärändarna inuti alla injektionsflaskan på samma nivå, 3 till 4 centimeter från locket.

Placera förberedda CAFE-analyser i en plastlåda med ett gallerinlägg. Använd en svampbung för att applicera 100 mikroliter färskvatten var 24: e timme för att hålla luftfuktigheten konstant inuti analysen. Använd fyra separata injektionsflaskor fyllda med 30 milliliter dubbeldestillerad H2O som fuktighetsanordningar och placera dem bredvid CAFE-analyserna i plastlådan.

Täck plastlådan för att skapa en fuktstyrd miljö under försöket.

I slutet av analysen och innan kapillären byts ut, håll CAFE-analysen i upprätt läge.

Mät meniskens nedgång. Kassera sedan de gamla kapillärerna. Ta sedan försiktigt bort kapillärerna från analysen och lagra dem för datainsamling. Kontrollera om vätskan inuti kapillären nådde den nedre änden. Om vätskan inuti kapillären inte nådde den nedre änden, kassera data.

Efter försöket demonterar du inställningarna och tvättar injektionsflaskan, locken och svampbullarna i ett tvålbad.