CApillary FEeder (CAFE) Tahlil: Drosophila'da Gıda Tüketimini ve Tercihini İzleme Yöntemi

- Kılcal Besleyiciye veya CAFE testine hazırlanmak için, önce önceden monte edilmiş bir deneysel şişenin üstündeki pipet uçlarından renkli, sıvı gıdalarla dolu dereceli veya işaretli cam kılcal damarları yerleştirin.

Her kılcal damardaki menisküsin başlangıç seviyesini işaretleyin. Daha sonra şişeleri gerektiğinde kılcal damarları değiştirirken deney süresince sıcaklık, nem ve ışık kontrollü bir ortamda barındırın. CAFE tahlili sırasında, mobil sinekler sınırsızdır ve mikropipinin alt açık ucuna serbest erişime sahiptir. Sinekler hortumlarını uzatırken ve sıvıyı alırken gönüllü olarak beslenirler ve kılcal damar içindeki ortamı azaltırlar.

Belirli bir zaman dilimi için gıda tüketimini ve tercihini izlemek için, menisküsün başlangıç işaretinden o dönemin sonundaki seviyeye inişini uygun kılcal damarlardan kaydedin. Örnek protokolde, sıvı dolu kılcal damarlardan daha az buharlaşma elde etmek için modifiye edilmiş montaj ile CAFE testini göreceğiz.

- Dış açıklıklardan birini kapatan pipet ucunu dikkatlice çıkarın ve dolgulu bir cam kılcal damar yerleştirin, önce alt uç. Pipet ucunu kılcal damarın yanına geri koyarak kılcal damarı sabitleyin. Test edilen tüm gıda çözümleri için bu adımı tekrarlayın.

Daha sonra, kılcal uçları kapaktan 3 ila 4 santimetre uzaklıkta, aynı seviyedeki tüm şişelerin içine yerleştirin. Kılcal damarların sızmasını önlemek için filtre kağıdı arasında biraz mesafe bırakın. Renkli sıvının üst ucunun etiketlenebilmesi için bir işaret kalemi kullanın. Farklı kılcal damarların tanımlanabilmesini sağlamak için bir şerit kodu kullanarak tek tek etiketleyin.

Hazırlanan CAFE testlerini ızgara kakma ile plastik bir kutuya yerleştirin.. Test içinde nemi sabit tutmak için her 24 saatte bir 100 mikrolitre tatlı su uygulamak için sünger bung kullanın.. Nem cihazları olarak 30 mililitre çift damıtılmış H2O ile dolu dört ayrı şişe kullanın ve plastik kutudaki CAFE testlerinin yanına yerleştirin.

Deney sırasında nem kontrollü bir ortam oluşturmak için plastik kutuyu örtün. Kutuyu deneysel dönem için sıcaklık, ışık ve nem kontrollü bir iklim odasında güvenli bir konuma aktarın. Her 24 saatlik aralıkta ölü sinekleri not edin ve bir sonraki dönem için sinek başına tüketimi hesaplamak için canlı sinek sayısını kullanın.

Tahlilin sonunda ve kılcal damarı değiştirmeden önce CAFE testini dik pozisyonda tutun. Kapağı çıkarmayın ve kılcal damarın alt menisküsünü işaretleyin. İşaret ucu ilk işaretin altında değilse verileri atın. Kullanılan kılcal damarları her 24 saatte bir uzun süreli deneyler için taze doldurulmuş kılcal damarlarla değiştirin.

Menisküsün düşüşünü ölçün. Sonra eski kılcal damarları atın. Sonra kılcal damarları tahlilden dikkatlice çıkarın ve veri toplama için saklayın. Kılcal damarın içindeki sıvının alt uca ulaşıp ulaşmadığını kontrol edin. Kılcal damarın içindeki sıvı alt uca ulaşmadıysa, verileri atın.

Deneyden sonra, kurulumu sökün ve şişeleri, kapakları ve sünger maşaları bir sabun banyosunda yıkayın. Daha fazla kullanım için oda sıcaklığında gece boyunca kurutun. Aynı genotiplerle yapılan deneyleri en az üç farklı günde tekrarlayın. Bir kaliper kullanarak, kılcal damardaki işaret başlangıcı ve işaret ucu arasındaki mesafeyi ölçün. Son olarak, ölçümden sonra kılcal damarları atın.