Tracciamento delle mosche che camminano liberamente: un metodo per valutare la locomozione in Drosophila

- Usa un'arena coperta, ad esempio una piastra di Petri piena di silicone chiaro, per assicurarti che le mosche possano camminare liberamente, ma non siano in grado di volare all'interno dell'arena quando è coperta. Posiziona il piatto su una superficie illuminata di bianco e posiziona una telecamera direttamente sopra.

Con il coperchio aperto, trasferire le mosche anestetizzate nel piatto, coprirlo e consentire ai soggetti di riprendersi. Le mosche si muoveranno liberamente nell'arena durante la prova. Per valutare la locomozione, tracciare la posizione di ogni mosca nel tempo e calcolare i parametri che caratterizzano la locomozione, ad esempio la distanza percorsa da ogni mosca. In questo protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione dell'impostazione e dell'analisi del test utilizzando il software di tracciamento video.

- Per tracciare i movimenti di volo in una piastra di Petri, prima, riempire una piastra di 6 centimetri con elastomero in silicone trasparente per creare l'arena di tracciamento. Lasciare uno spazio di 3 millimetri tra il silicone e il coperchio, in modo che le mosche possano camminare liberamente nel vuoto, ma non prendere il volo. Sotto l'arena di tracciamento, avere uno sfondo bianco.

Quindi, anestetizza quattro mosche dello stesso gruppo di trattamento e posizionale nell'arena. Lascia che le mosche si acclimatino per un'ora all'arena, che dovrebbe essere completamente illuminata e a circa 22 gradi Celsius, non più calda della temperatura ambiente. Dopo un'ora, usa una fotocamera del dispositivo accoppiata alla carica posizionata sopra l'arena per registrare l'attività della mosca per 5 minuti.

Dopo la registrazione di 5 minuti, anestetizza le mosche nell'arena e restituiscile a una nuova fiala domestica. Quindi, smaltire l'arena. In seguito, analizzare le registrazioni utilizzando il software Ctrax liberamente disponibile. Questo software genera dati di tracciamento, che possono essere esportati in un formato programmabile compatibile con la lingua, come il formato MATLAB.

Dai dati, calcolare la distanza percorsa per fotogramma, la distanza media a piedi per ogni mosca e la distanza media percorsa per volo. Per la significatività statistica, si prevede di testare circa 100 mosche per gruppo di trattamento.