क्यूटिकल व्यवधान: ड्रोसोफिला लार्वा से हीमोलिम्फ एकत्र करने की एक विधि

- शुरू करने के लिए, एक साफ विच्छेदन पैड पर बफर की एक बूंद पिपेट। फिर, बूंद पर एक सूखे जीवित लार्वा रखें। ड्रोसोफिला में अन्य आर्थ्रोपोड्स की तरह एक खुली संचार प्रणाली होती है जिसमें हृदय शरीर के चारों ओर हीमोलिम्फ पंप करता है, आंतरिक अंगों को स्नान करता है। हीमोलिम्फ को छोड़ने के लिए, जो कि आर्थ्रोपोड्स का संयुक्त रक्त और इंटरस्टिटियल तरल पदार्थ है, बल का उपयोग करें और कटिकल को खोलते हैं, अर्ध-कठोर लार्वा।

फिर, शव को त्यागें और एक माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में ठंडा बफर समाधान के लिए विच्छेदन प्लेट से हीमोलिम्फ समाधान स्थानांतरित करें। अंत में, हीमोसाइट्स की संख्या, हीमोलिम्फ में कोशिकाओं की संख्या को गिनने के लिए एक हीमोसाइटोमीटर का उपयोग करें, जो एकत्र किए गए थे। इस प्रोटोकॉल में, हम ड्रोसोफिला मेलनोगेस्टर लार्वा से हीमोफ्लिम्फ एकत्र करेंगे।

- एक माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में 1x पीबीएस के 10 माइक्रोलीटर जोड़कर हीमोलिम्फ संग्रह शुरू करें, और ट्यूब को बर्फ पर रखें। इसके बाद, 1x पीबीएस की 10 माइक्रोलीटर ड्रॉप को एक साफ विच्छेदन पैड पर रखें। एक व्यक्तिगत लार्वा का चयन करें, और इसे ऊतक पोंछ पर रखकर सुखाएं।

संदंश का उपयोग करके, धीरे-धीरे खुले आंसू और हीमोलिम्फ को छोड़ने के लिए क्यूटिकल को उलटा करें, और फिर शव को त्याग दें। एक पिपेट के साथ, विच्छेदन पैड से हीमोलिम्फ एकत्र करें। आइस्ड पीबीएस माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में हीमोलिम्फ जोड़ें, और ऊपर और नीचे पाइपिंग करके मिलाएं। नमूने के 10 माइक्रोलीटर को हीमोसाइटोमीटर कक्ष में लोड करें और एकाग्रता प्राप्त करें।