Rompimento da cutícula: um método para coletar hemoglifos de larvas de Drosophila

- Para começar, pipeta uma gota de tampão em uma almofada de dissecação limpa. Em seguida, coloque uma larva de vida seca na gotícula. Drosophila, como outros artrópodes, tem um sistema circulatório aberto no qual o coração bombeia hemisfão ao redor do corpo, banhando os órgãos internos.

Em seguida, descarte a carcaça e transfira a solução hemoglifo da placa de dissecação para a solução tampão resfriado em um tubo de microcentrifuso. Por fim, use um hemócito para contar o número de hemócitos, as células do hemisfão, que foram coletadas. Neste protocolo, vamos coletar hemoglifos de Dphilrosoa melanogaster larvas.

- Inicie a coleta de hemoglifo adicionando 10 microlitadores de 1x PBS a um tubo de microcentrifuuge, e colocando o tubo no gelo. Em seguida, coloque uma gota de 10 microliteres de 1x PBS em uma almofada de dissecação limpa. Selecione uma larva individual e seque-a colocando-a em uma limpeza de tecido.

Usando fórceps, rasgue suavemente e inverta a cutícula para liberar o hemolifa e, em seguida, descarte a carcaça. Com uma pipeta, colete o hemoglifo da almofada dissecando. Adicione o hemolíquifo ao tubo de microcentrifuge PBS gelado, e misture por pipetar para cima e para baixo. Carregue 10 microliters da amostra em uma câmara de hemocitômetro e faça uma leitura de concentração.