Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Во взрослой мухе, непрямые мышцы полета, или IFMs, являются крупнейшими мышцами мухи, охватывающих всю грудную клетку. IFMs организовать характерные высокочастотные движения крыла в двухкрылых мух, в том числе Drosophila. Две противоположные группы мышечного волокна составляют IFMs.
Во-первых, спинные продольные мышцы, или DLMs, расположены вдоль средней плоскости грудной клетки над кишечником и охватывают от передней до задней. Во-вторых, спинной брюшной мышцы, или DVMs, пролет сверху до нижней части грудной клетки и в окружении TDT, или прыгать мышцы.
Примерно через 48 часов после образования пупариума, или APF, созревание IFMs может быть визуально идентифицировано с помощью простого микроскопа вскрытия. В примере протокола мы будем собирать IFM из куколок старше 48 часов APF для анализа высокой пропускной способности.
- Для вскрытия IFM после 48 часов APF, используйте слегка смочеченную кисть краски для передачи постановочных куколок на полосу двусторонний липкой лентой, установленной на слайде микроскопа. Ориентация куколок в линию, брюшной стороне вниз, и передней к нижней части слайда. Когда все куколки были помещены, использовать типсы, чтобы дразнить друг от друга и открыть первый корпус щенка над передней spiracles, и осторожно слайд пару типсов спинно к задней, резки куколки случае, как миппы двигаться.
Освободите куколку из открытого корпуса и немедленно перенесите куколку на каплю PBS на второй слайд микроскопа.Когда все куколки будут освобождены, используйте тонкие ножницы, чтобы отрезать живот от грудной клетки и подтолкнуть животы в отдельную кучу.
Добавить каплю свежего охлажденного PBS к остальным грудной клетки, прежде чем использовать ножницы, чтобы вырезать из головы вдоль продольной оси тела в одном движении, чтобы разделить грудную клетку пополам. Когда все куколки были вскрыты, используйте номер пять типсов, чтобы выбрать один из полушарий и осторожно вставить кончики одного типса выше и ниже середины IFMs.
Холдинг первой пары типсов еще, использовать тонкие ножницы, чтобы сократить один конец IFM от кутикулы и сухожилий перед вращением куколки 180 градусов, чтобы другой конец IFM быть вырезаны из кутикулы и сухожилий. Используйте типсы для передачи IFM расслоение из грудной клетки на край пузыря PBS с помощью воды напряженности провести расслоение на месте.
Затем нажмите тушу на противоположную сторону слайда и рассеките остальные МФМ таким же образом. Когда все IFMs были собраны, используйте номер пять типсов, чтобы удалить любой прыжок мышцы или кутикулы фрагменты, которые, возможно, нашли свой путь в образцах. Затем, использовать натяжение воды, чтобы мягко захватить вскрытые IFMs между парой типсов и поместить IFMs в 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки, содержащей 250 микролитров охлажденных PBS.
