Encyclopedia of Experiments: Biology
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- En la mosca adulta, los músculos de vuelo indirectos, o IFM, son los músculos más grandes de la mosca que abarcan todo el tórax.
En primer lugar, los músculos longitudinales dorsales, o LDLMs, se encuentran a lo largo del plano medio del tórax por encima del intestino y el lapso de anterior a posterior. Segundo, los músculos ventrales dorsales, o DVMs, se extienden desde la parte superior hasta la parte inferior del tórax y están flanqueados por el TDT, o músculo de salto.
A unas 48 horas después de la formación del puparium, o APF, las IFM madurares se pueden identificar visualmente con un simple microscopio de disección. En el protocolo de ejemplo, recogeremos IFM de pupas mayores de 48 horas APF para un análisis de alto rendimiento.
- Para la disección IFM después de 48 horas APF, utilice un pincel ligeramente mojado para transferir la pupae escenificada a una tira de cinta pegajosa de doble cara montada en un tobogán de microscopio. Orientar a la pupae en una línea, lado ventral hacia abajo, y anterior hacia la parte inferior de la diapositiva. Cuando se hayan colocado todas las pupas, use fórceps para burlarse y abrir la primera caja de pupal por encima de las espigas anteriores, y deslice suavemente un par de fórceps dorsalmente hacia la parte posterior, cortando la caja pupal a medida que los fórceps se mueven.
Libere la pupa de la caja abierta, y transfiera inmediatamente la pupa a una gota de PBS en un segundo tobogán del microscopio. Cuando todas las pupas sean liberadas, use tijeras finas para cortar el abdomen de las pupas lejos del tórax y empujar los abdomens en una pila separada.
Agregue una gota de PBS frío fresco a los tórax restantes antes de usar las tijeras para cortar desde la cabeza a lo largo del eje longitudinal del cuerpo en un solo movimiento para dividir el tórax por la mitad. Cuando todas las pupas hayan sido diseccionadas, utilice las fórceps número cinco para seleccionar una de las hemisecciones e inserte suavemente las puntas de una fórceps por encima y por debajo del centro de las IFM.
Sosteniendo el primer par de fórceps todavía, utilice tijeras finas para cortar un extremo de la IFM lejos de la cutícula y tendones antes de girar la pupa 180 grados para permitir que el otro extremo de la IFM se corte libre de la cutícula y tendones.
A continuación, empuje la carcasa al lado opuesto de la diapositiva y disecciona el resto de las IFM de la misma manera. Cuando se hayan recogido todas las IFM, utilice los fórceps número cinco para eliminar cualquier músculo de salto o fragmentos de cutícula que hayan encontrado su camino en las muestras.
