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Encyclopedia of Experiments: Biology

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Préparation de diapositives Nématode

 
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Préparation de diapositives Nématode : Une méthode pour monter des animaux sur un tampon d’agar

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- Tout d’abord, placez une lame de microscope entre deux autres diapositives avec du ruban adhésif. Celles-ci fournissent un soutien et des espaceurs pour la préparation de la garniture agarose. Ensuite, placez une goutte d’agarose fondue sur la glissière. Appuyez immédiatement dessus avec une autre diapositive.

Une fois l’agarose solidifie, séparez soigneusement les glissières de sorte que l’agarose reste sur une glissière. Toujours utiliser des coussinets fraîchement faits car les tampons séchés peuvent déshydrater les animaux. Assurez-vous qu’il n’y a pas de fissures ou de bulles, ce qui peut perturber l’intégrité du tampon.

Ensuite, ajoutez une goutte d’anesthésique au centre de la garniture et transférez 10 à 15 animaux à elle, apportant le moins de bactéries possible avec eux. Les bactéries excédentaires pourraient interférer avec l’imagerie. Si la solution anesthésique se dessèche, ajoutez une deuxième goutte sur les animaux.

Placez doucement un coverslip sur le coussin. Évitez de former des bulles ou de lui mettre trop de pression pour éviter d’endommager les animaux. Enfin, étiquetez la lame, qui est prête pour l’imagerie.

- Commencez par préparer des diapositives pour l’imagerie. Placez une goutte d’agarose fondue sur une lame de microscope et appuyez immédiatement sur la gouttelette avec une autre lame de microscope aplatissant doucement l’agarose Besoin de l’agarose à sécher pendant une minute.

Ensuite, séparez soigneusement les deux glissières et laissez la garniture solidifiée sur l’une des glissières. Placez la lame sur la scène du microscope et ajoutez une goutte d’anesthésique de 5 à 10 microlitres au centre de la garniture d’agras.

Utilisez une pioche stérilisée par la chaleur pour transférer rapidement 10 à 15 animaux de la plaque de bouillon à la gouttelette anesthésique avant que la solution ne sèche. Ensuite, appliquez un coverslip en le positionnant juste au-dessus de la garniture agarose et en la laissant tomber doucement.

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