Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 단일 웜 PCR 분석을 위해, hermaphrodite 벌레가 유전자적으로 동일한 자손을 생성하고 따라서 수정 된 균주의 사본을 보존하여 수정 된 균주의 사본을 보존하는 알을 스스로 비옥하게하고 낳을 수 있도록 하십시오.
튜브를 영하 80도에서 동결하여 큐티클 또는 외부 층을 깨뜨게 합니다. 샘플을 섭씨 60도더에 가열하여 세포의 게놈 DNA와 함께 세포내 단백질을 방출하는 벌레 세포를 lyse. 이 온도에서 완충제 내의 단백질은 단백질, 특히 유전체 DNA를 파괴할 핵을 저하시니다.
이어서, 온도를 95도로 올려 효소를 비활성화합니다. 마지막으로, 반응 완충, dNTP, 전방 및 역프라이머로 구성된 PCR 마스터 믹스를 사용하여 튜브에 세포 용액을 첨가하여 관심 영역, taq 폴리머라제 및 물은 원하는 최종 부피에 반응을 가져온다.
다음 예제에서는 단일 F1 웜의 게놈 DNA에서 CRISPR-Cas9 편집 이벤트를 선별하는 PCR 절차를 볼 수 있습니다.
- 1~2일 간의 달걀 누워 후 웜 픽시를 사용하여 F1s를 따뜻한 용해 버퍼 7 마이크로리터가 들어있는 개별 PCR 스트립 튜브 캡으로 옮기십시오.
다음으로, 다음 프로그램을 사용하여 열 사이클러에 얼어 붙은 웜을 lyse.
깨끗한 PCR 튜브에 PCR 마스터 믹스 21 마이크로 리터를 추가한 다음 웜 리시스 튜브의 마이크로 리터 4를 추가하고 파이펫팅으로 잘 섞습니다.
그런 다음 제조업체의 지침에 따라 PCR 프로그램을 실행합니다.
