四向嗅觉仪测定：评估德罗索菲拉气味提示反应的方法

- 四向嗅觉仪是一个封闭的腔室，每个角落都有单向端口，通过它可以发出多达四种气味，产生具有明显气味特征的象限。开始实验，将清醒苍蝇转移到腔室中。 避免麻醉，因为这可能会影响他们在实验中的行为。

将苍蝇暴露在清洁空气中，观察它们的运动，以确保没有气味污染物会破坏嗅觉计并影响飞行行为。 然后，在单独的小瓶中准备测试气味，并通过单向端口将它们连接到主腔室。 将苍蝇暴露在气味中一段时间，在试验结束后去除刺激。

苍蝇在走向和安顿在带有诱人气味的象限中时，往往避免使用驱虫气味的象限。在探索嗅觉仪时，通过跟踪它们的位置来测量苍蝇的气味提示行为反应。

在下列协议中，我们将使用带有空气输送系统的四象限嗅觉仪来分析飞行行为，以响应乙基丙酸酯、驱虫剂和苹果醋，这很有吸引力。

- 至少提前五分钟，打开温度控制器，将其设置为 25 摄氏度。 然后，通过塑料管将气味室连接到竞技场。使用电子流量计检查竞技场每个象限中的气流速率。确保控制、气味和气流均以每分钟100 毫升的速度运行。

- 苍蝇对气流非常敏感，在每个实验之前验证每个象限的气流至关重要。

- 现在，使用70%乙醇清洁竞技场和玻璃板。 将所有部件向下擦拭两到三次，使其在继续前完全空气干燥。接下来，将玻璃板夹到竞技场上。 然后，将苍蝇转移到竞技场，无需麻醉。 使用重力，让他们通过一个玻璃板的孔进入，然后用圆形网格盖住孔。

现在，将满载飞翔的竞技场放入光线密闭的室内，然后将四条控制空气流连接到每个竞技场的角落，关闭房间的门，让苍蝇适应新环境10至15分钟。

适应期结束后，进行5至10分钟的控制实验，让苍蝇暴露在四条控制气流中。现在必须立即分析数据。如果苍蝇在竞技场上分布不均匀，必须重置竞技场。

- 测试控制苍蝇的行为只是为了清洁空气至关重要。这将迅速验证所有背景条件是否正常。光线泄漏、温度不平衡、竞技场倾斜或气味污染都会导致问题。

- 如有必要， 丢弃苍蝇，再次清洁竞技场。如果怀疑有异味污染， 更换所有管子。 继续用新的队列重复控制测试，直到动物不偏爱四个象限中的任何一个。然后，使用三向阀将测试气味室连接到设置，或重新连接管子并运行测试实验 5 到 10 分钟。 对于更长的实验记录，请每 20分钟快速停止并重新启动跟踪程序，否则数据文件将太大。

在测试之间，丢弃苍蝇，用70%的乙醇清洁竞技场和玻璃板，并更换连接管。保持干燥的气流不断冲洗系统。为了效率，最好有两个竞技场，这样在跑步过程中就可以进行清洁。

- 如果在同一天进行几个实验，请格外小心，以确保系统中不再有前一次运行的气味。这通常不是低浓度的气味或二氧化碳的问题。但对于高度集中的刺激，可能需要在实验运行之间长达 24 小时的间隔。