Четырехдневный анализ Ольфактометра: метод оценки ответов Одоранта-Кюда в Дрозофиле

- Четырехсторонний ольфактометр – это закрытая камера с портами с одним путем на каждом углу, через которую она может доставлять до четырех запахов, создавая квадранты с различными профилями запаха.

Разоблачить мух на чистый воздух и наблюдать за их движениями, чтобы убедиться, что никакие запахи не загрязняют olfactometer и влияющих на поведение мухи. Затем, подготовить тест паханты в отдельных флаконах и подключить их к основной камере через порты с одной стороны. Expose мух на одоранты для заранее определенного периода, удаление стимула после окончания судебного разбирательства.

Мухи, как правило, чтобы избежать квадрантов с репеллентными запахами при движении к и урегулирования в квадрантах с привлекательными запахами. Измерьте мух запах-cued поведенческие реакции, отслеживая их позиции с течением времени, как они исследуют olfactometer.

В следующем протоколе мы будем использовать четырех квадрантный ольфактометр с системой доставки воздуха для анализа поведения мух в ответ на этиловый пропионат, репеллентный одорант и яблочный уксус, который является привлекательным.

- По крайней мере за пять минут до этого включите контроллер температуры и установите его до 25 градусов по Цельсию. Затем подключите одорантные камеры к арене через пластиковую трубку. Проверьте скорость потока воздуха в каждом квадранте арены с помощью электронного счетчика потока. Убедитесь, что управление и запах и воздушные потоки работают на 100 миллилитров в минуту.

- Мухи очень чувствительны к воздушному потоку, и очень важно, чтобы воздушный поток для каждого квадранта проверялся перед каждым экспериментом.

- Теперь очистите арену и стеклянные пластины, используя 70% этанола. Протрите все детали вниз два-три раза и дайте им полностью высохнуть перед началом. Далее зажимите стеклянные пластины на арену. Затем перенесите мух на арену без анестезии.

Теперь поместите нагруженную мухой арену в светоутягиваную камеру. Затем соедините четыре потока воздуха управления с каждым углом арены.

После периода акклиматизации проведите 5-10-минутный контрольный эксперимент, в ходе которого мухи подвергаются воздействию четырех контрольных воздушных потоков.

- Очень важно проверить поведение управления летит только чистый воздух. Это быстро проверить, что все фоновые условия являются нормальными. Утечка света, дисбаланс температуры, наклонена арене, или запах загрязнения все могут вызвать проблемы.

- При необходимости отбросьте мух и снова очистите арену. Если подозревается загрязнение одорантом, замените все трубки. Продолжайте повторять контрольный тест новыми когортами до тех пор, пока животные не отберут предпочтение ни одному из четырех квадрантов. Затем подключите камеру пробного запаха к установке с помощью трехстороннего клапана, или подключите трубку и запустите тестовый эксперимент в течение 5-10 минут.

Между тестами, отбросить мух, очистить арену и стеклянные пластины с 70% этанола, и заменить разъем труб. Держите сухой поток воздуха будет постоянно промыть систему. Для эффективности, это хорошо иметь две арены, чтобы очистка может быть сделано во время работает.

- Если несколько экспериментов проводится в один и тот же день, обратите крайнюю осторожность, чтобы убедиться, что запах не остается в системе от предыдущего запуска. Это, как правило, не проблема с низкой концентрацией одоранта или с CO2. Но для высококонцентрированных стимулов, до 24-часовой разрыв между экспериментом работает может потребоваться.