ショウジョウバエ Y迷路アッセイ:ハエの嗅覚応答を評価する方法

- Y迷路は、まっすぐまたは先細りのチューブで接続された3つのフライバイアルを持つY字型のコネクタで構成されています。ハエは好きな刺激で迷路を横に移動します。

次に、 飢えたハエを遅くする。化学麻酔を使わないで、アッセイの結果に影響を与える可能性があります。冷たいハエとバイアルを素早く迷路の最後の側に接続してください。

プロトコル例では、野生型ショウジョウバエによるY迷路アッセイの設定が見られます。

- 翌朝アッセイを行う前に、一日の終わりに、 10~20本の実験ラインのコホートを濡れたタオルから与えられた水分でガラスバイアルに移す。ハエは16〜18時間でテストされなければならないか、乾燥や飢餓のために死ぬ可能性があります。

「Y」の3番目の枝は、ピペットチップの大部分から作られたローディングチューブに取り付けられ、積み込みバイアルから迷路の選択ポイントへの通路を可能にします。

テストを行うには、まず氷の上でハエを短時間冷やすので、ハエは減速します。これはLED電球からの遠赤色光の下にあり、摂氏25度で、ハエのコホートを負荷バイアルにそっと落とし、テストハエでY迷路をロードします。

- ハエを素早く穏やかに積み込みバイアルに移すのは本当に重要です。Y迷路で臭気が拡散する前にハエが急速に目を覚まさなければならないので、実際にはこの実験の最も困難なステップです。

- ハエは24時間迷路を探索することを許可する必要がありますので、ハエの最大数は1つまたは他のガラスバイアルに移動します。異なるチューブに存在するハエの数は嗅覚指数を計算するのに役立ちます。

10フライコホートが一貫した結果を提供していない場合は、20フライコホートで試験を実行することができます。迷路コンポーネントをクリーンアップし、それらを浸し、解体し、RBS 35 MDで一晩で解体します。