Drosophila Y-maze Assay: En metode for å vurdere olfaktoriske svar i fluer

- En Y-labyrint består av en Y-formet kontakt med tre flueglass koblet til den med rette eller koniske rør. Fluer beveger seg gjennom labyrinten mot siden med stimulansen de foretrekker. For å starte eksperimentet, plasser et vevspapir med løsningen som inneholder de flyktige kjemikaliene i hvert hetteglass. Koble dem deretter til de koniske rørene. De koniske rørene begrenser fluenes evne til å gå tilbake til midten av labyrinten og bremser spredningen av de flyktige kjemikaliene.

Deretter sultet chill sultne fluer for å bremse dem ned. Ikke bruk kjemisk anestesi, da dette kan påvirke utfallet av analysen. Koble raskt hetteglasset med de avkjølte fluene til den endelige siden av labyrinten. La fluene utforske labyrinten. For å redusere enhver preferanse forårsaket av sterkt lys, utfør dette trinnet under fjernt rødt lys, som fluer ikke ser. Til slutt teller fluene på hver side av labyrinten. Deres plassering i labyrinten indikerer deres preferanse mot den flyktige kjemiske duften.

I eksempelprotokollen vil vi se et oppsett av Y-labyrintanalysen med vill type Drosophila.

- Før du utfører analysen neste morgen, på slutten av dagen, overfør kohorter på 10 til 20 eksperimentelle linjer til glassflasker med fuktighet fra et vått håndkle. Fluene må testes om 16 til 18 timer, eller de kan dø på grunn av uttørking eller sult. Neste dag monterer du Y-labyrinten. Start med å koble den Y-formede kontakten til to glassflasker ved hjelp av skumkontakter med trimmede pipettespisser som gjør ledningene. Deres avsmalnende form gjør disse enveispassasjene.

Den tredje grenen av "Y" er festet til et lasterør, laget av den store delen av en pipettespiss, og tillater passasje fra lasteflasken til valgpunktet til labyrinten. Utover hver avsmalnende tunnel er et hetteglass med glass, hvorav den ene må lastes med en lukt. Last disse som 40-mikroliter boluses gjennomvåt i 28 millimeter firkanter av vevpapir.

For å gjennomføre testen, må du først avkjøle fluene på isen kort, slik at fluene bremses ned. Dette bør være under fjernt rødt lys fra LED-pærer og ved 25 grader Celsius. Slipp forsiktig kohorten av fluer inn i lastehette og last Y-labyrinten med testfluene. Ikke bruk gassbedøvelse.

- Det er veldig viktig å overføre fluene til lastevinet både raskt og forsiktig. Det er faktisk det vanskeligste trinnet i dette eksperimentet fordi fluer må våkne raskt før diffusjon av lukt i Y-labyrinten.

- Fluene skal få lov til å utforske labyrinten i 24 timer, så et maksimalt antall fluer beveger seg til det ene eller det andre hetteglasset i glass. Antall fluer til stede i de forskjellige rørene tjener til å beregne den olfaktoriske indeksen. Standard statistiske metoder skal brukes på denne verdien, samlet fra oppførselen til opptil 10 fluer.

Hvis 10-fly kohorter ikke gir konsistente resultater, kan forsøkene kjøres med 20-fly kohorter. For å rydde opp labyrintkomponentene, suge dem, demonteres, i RBS 35 MD over natten. Følg dette med skylling i vann fra springen og en siste skylling i DI-vann før lufttørking.