Дрозофила Y-лабиринт анализа: метод оценки обонятельных ответов в мухах

- Y-лабиринт состоит из Y-образного разъема с тремя флаконами мухи, соединенными с ним прямыми или конические трубки. Мухи перемещаются через лабиринт в сторону с стимулом, который они предпочитают.

Далее, холод голодали мухи, чтобы замедлить их. Не используйте химическую анестезию, так как это может повлиять на исход анализа. Быстро подключите флакон с охлажденными мухами к конечной стороне лабиринта. Оставьте мух исследовать лабиринт. Чтобы уменьшить любые предпочтения, вызванные ярким светом, выполнить этот шаг под дальним красным светом, который мухи не видят.

В примере протокола мы увидим установку анализа Y-лабиринта с диким типом Drosophila.

- Перед проведением анализа на следующее утро, в конце дня, перенос когорт от 10 до 20 экспериментальных линий на стеклянные флаконы с влагой, предоставляемые из мокрого полотенца. Мухи должны быть проверены в 16-18 часов, или они могут умереть из-за высыхания или голода. На следующий день, собрать Y-лабиринт. Начните с присоединения Y-образный разъем к двум стеклянным флаконам с использованием пены разъемы с обрезанными кончиками пипетки, которые делают каналы.

Третья ветвь "Y" крепится к погрузочной трубке, изготовленной из большой части наконечника пипетки, и позволяет пройти от погрузочного флакона до места выбора лабиринта. За каждым сужающиеся туннеля находится стеклянный флакон, один из которых должен быть загружен одорантом.

Для проведения теста сначала охладите мух на льду ненадолго, чтобы мухи замедлились. Это должно быть под дальним красным светом от светодиодных ламп и при 25 градусах по Цельсию. Аккуратно уроните когорту мух в погрузочный флакон и загрузите Y-лабиринт с испытательными мухами. Не используйте газовую анестезию.

- Очень важно быстро и мягко перенести мух на погрузочный флакон. На самом деле это самый сложный этап этого эксперимента, потому что мухи должны быстро проснуться перед диффузией запахов в Y-лабиринте.

- Мухам должно быть позволено исследовать лабиринт в течение 24 часов, поэтому максимальное количество мух переходить на тот или иной стеклянный флакон. Количество мух, присутствующих в разных трубках, служит для расчета обонятельного индекса. Стандартные статистические методы должны применяться к этому значению, собранному из поведения до 10 мух.

Если 10-летые когорты не обеспечивают последовательных результатов, испытания могут быть запущены с 20-летом когорты. Чтобы очистить лабиринт компонентов, замочить их, демонтированы, в RBS 35 MD ночь. Следуйте за этим с полосканиями в водопроводной воде и окончательное полоскание в воде DI до высыхания воздуха.