Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Un laberinto Y consiste en un conector en forma de Y con tres viales de mosca conectados a él por tubos rectos o cónicos. Las moscas se mueven a través del laberinto hacia un lado con el estímulo que prefieren.
A continuación, Enfriar las moscas hambrientas para ralentizarlas. No utilice anestesia química, ya que esto puede afectar el resultado del ensayo. Conecte rápidamente el vial con las moscas frías al lado final del laberinto.
En el protocolo de ejemplo, veremos una configuración del ensayo Y-maze con tipo salvaje Drosophila.
- Antes de realizar el ensayo a la mañana siguiente, al final del día, transfiera cohortes de 10 a 20 líneas experimentales a viales de vidrio con humedad proporcionada a partir de una toalla húmeda. Las moscas deben ser probadas en 16 a 18 horas, o podrían morir debido a la desecación o el hambre. Al día siguiente, ensamblar el laberinto Y. Comience por unir el conector en forma de Y a dos viales de vidrio usando conectores de espuma con puntas de pipeta recortadas que hacen los conductos.
La tercera rama de la "Y" está unida a un tubo de carga, hecho de la gran porción de una punta de pipeta, y permite el paso desde el vial de carga hasta el punto de elección del laberinto. Más allá de cada túnel cónico hay un vial de vidrio, uno de los cuales debe ser cargado con un olor.
Para llevar a cabo la prueba, primero enfríe las moscas sobre hielo brevemente, para que las moscas se ralenticen.
- Es realmente crítico transferir las moscas al vial de carga tanto rápida como suavemente.
- Se debe permitir que las moscas exploren el laberinto durante 24 horas, por lo que un número máximo de moscas se mueven a uno u otro vial de vidrio. El número de moscas presentes en los diferentes tubos sirve para calcular el índice olfativo.
Si las cohortes de 10 moscas no están proporcionando resultados consistentes, los ensayos se pueden ejecutar con cohortes de 20 moscas. Para limpiar los componentes del laberinto, remojarlos, desmantelarlos, en RBS 35 MD durante la noche.
