Drosophila Y-labirent Tahlil: Sineklerde Koku Yanıtlarını Değerlendirme Yöntemi

- Bir Y labirenti, düz veya konik tüplerle birbirine bağlı üç sinek şişesi ile Y şeklinde bir konnektörden oluşur. Sinekler labirentten tercih ettikleri uyaranla yana doğru hareket ederler. Deneye başlamak için, uçucu kimyasalları içeren çözeltiye sahip bir kağıt mendili her şişeye yerleştirin. Sonra, onları konik tüplere bağlayın. Konik tüpler, sineklerin labirentin merkezine geri dönme yeteneğini sınırlar ve uçucu kimyasalların difüzyonunu yavaşlatır.

Sonra, onları yavaşlatmak için aç sinekleri soğutun. Kimyasal anestezi kullanmayın, çünkü bu tahlil sonucunu etkileyebilir. Şişeyi soğutulmuş sineklerle labirentin son tarafına hızla bağlayın. Labirenti keşfetmek için sinekleri bırakın. Parlak ışığın neden olduğu herhangi bir tercihi azaltmak için, sineklerin görmediği uzak kırmızı ışık altında bu adımı gerçekleştirin. Son olarak, labirentin her iki tarafındaki sinekleri sayın. Labirentteki konumları, o uçucu kimyasal kokuya karşı tercihlerini gösterir.

Örnek protokolde, vahşi tip Drosophila ile Y labirenti testinin bir kurulumunu göreceğiz.

- Ertesi sabah tahlil yapmadan önce, günün sonunda, 10 ila 20 deneysel çizgiden oluşan kohortları ıslak havludan sağlanan nemle cam şişelere aktarın. Sinekler 16 ila 18 saat içinde test edilmelidir, aksi halde kurutma veya açlık nedeniyle ölebilir. Ertesi gün, Y labirentini monte edin. Y şeklindeki konektörü, kanal yapan kesilmiş pipet uçlarına sahip köpük konektörler kullanarak iki cam şişeye birleştirerek başlayın.

"Y" nin üçüncü dalı bir yükleme tüpüne tutturulur, pipet ucunun büyük kısmından yapılmış ve yükleme şişesinden labirentin seçim noktasına geçişe izin verir. Her konik tünelin ötesinde, biri bir kokulu ile yüklenmesi gereken bir cam şişe vardır. Bunları 28 milimetrelik doku kağıdı karelerine batırılmış 40 mikrolitre boluses olarak yükleyin.

Testi yapmak için, önce sinekleri buz üzerinde kısa bir süre soğutun, böylece sinekler yavaşlar. Bu LED ampullerden uzak kırmızı ışık altında ve 25 santigrat derecede olmalıdır. Sinek kohortlarını yavaşça yükleme şişesine bırakın ve Y labirentini test sinekleriyle yükleyin. Gaz anestezisi kullanmayın.

- Sineklerin yükleme şişesine hem hızlı hem de nazikçe aktarılması gerçekten çok önemlidir. Aslında bu deneyin en zor adımıdır çünkü sinekler Y labirentinde kokuların yayılmasından önce hızla uyanmak zorunda kalırlar.

- Sineklerin labirenti 24 saat boyunca keşfetmesine izin verilmelidir, bu nedenle maksimum sayıda sinek bir veya diğer cam şişeye taşınır. Farklı tüplerde bulunan sinek sayısı koku indeksini hesaplamaya yarar. Bu değere standart istatistiksel yöntemler uygulanmalıdır, 10 sinek davranışından toplanmalıdır.

10 uçucu kohortlar tutarlı sonuçlar vermiyorsa, denemeler 20 uçucu kohortlarla çalıştırılabilir. Labirent bileşenlerini temizlemek için, bir gecede RBS 35 MD'de ıslatın, sökün. Bunu musluk suyunda durulamalar ve hava kurumadan önce DI suyunda son bir durulama ile takip edin.