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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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स्थानीय हीट प्रोब परख

 
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स्थानीय हीट प्रोब परख: ड्रोसोफिला लार्वा में उच्च तापमान की नोक-ियत का आकलन करने के लिए एक विधि

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- गर्मी की जांच परख के लिए ड्रोसोफिला लार्वा तैयार करने के लिए, वांछित विकासात्मक चरण के जानवरों को इकट्ठा करें, और एक लार्वा को पानी की पतली फिल्म के साथ एक परीक्षण प्लेट पर स्थानांतरित करें। पानी लार्वा को प्लेट की सतह से चिपके बिना स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने की अनुमति देता है।

ड्रोसोफिला लार्वा अपने एपिडर्मिस में मल्टीडेंट्रिटिक संवेदी न्यूरॉन्स के माध्यम से हानिकारक थर्मल उत्तेजनाओं का पता लगाते हैं जिसे नोसिपेप्टर्स के रूप में जाना जाता है। ये तब तक आग नहीं लगाते जब तक कि एक निश्चित संवेदी सीमा तक नहीं पहुंच जाता, जैसे संभावित हानिकारक उच्च तापमान।

गर्मी की जांच को एक ऐसे तापमान पर सेट करें जो इस संवेदी दहलीज को पार कर जाएगा, और नकबजनों को आग लगाने का कारण बनेगा। गर्मी लागू करने के लिए लार्वा के खिलाफ जांच की नोक को धीरे-धीरे दबाएं। लार्वा थर्मो-निषेधात्मक व्यवहार के साथ हानिकारक तापमान का जवाब देगा, जांच से वापस ले जाएगा। जब लार्वा गर्मी की जांच से 360 डिग्री की भूमिका को प्रदर्शित करता है, या जब एक परिभाषित समय बीत चुका है तो रिकॉर्ड प्रतिक्रिया रिकॉर्ड करता है।

उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम शुरुआती तीसरे इंस्टार ड्रोसोफिला लार्वा पर स्थानीयकृत गर्मी जांच परख का प्रदर्शन देखेंगे।

- सबसे पहले, थर्मल प्रोब के तापमान को वांछित सेट बिंदु पर प्रीसेट करें। एक व्यक्तिगत लार्वा को धीरे-धीरे एक फ्लैट प्लेटफॉर्म पर स्थानांतरित करने के लिए एक तूलिका या संदंश का उपयोग करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि लावा पानी की एक पतली फिल्म से ढका हुआ है।

- दबाव में भिन्नता को कम करने के साथ-साथ गर्मी की जांच के सही स्थान और कोण को सुनिश्चित करने के लिए, अभ्यास सही बनाता है।

- खंड A4 पर लार्वा के खिलाफ जांच टिप को धीरे-धीरे दबाएं, जांच और लार्वा की सतह के बीच लगभग 45 डिग्री कोण पर टिप के साथ हल्का दबाव लागू करें। दबाव लार्वा की सतह पर थोड़ा इंडेंटेशन पैदा करना चाहिए, और आमतौर पर लोकोमोशन को रोकने के लिए पर्याप्त होगा। जब तक कि निकासी प्रतिक्रिया प्रदर्शित न हो जाए या 20-सेकंड कटऑफ तक न पहुंच जाए तब तक लार्वा को उत्तेजित करना जारी रखें।

लार्वा का जवाब आमतौर पर पहले सिर और पूंछ उठाने का प्रारंभिक व्यवहार दिखाते हैं, जिसके बाद कम से कम 360 डिग्री रोलिंग का वापसी व्यवहार होता है। एक बार निकासी व्यवहार शुरू होने के बाद, जांच के साथ संपर्क जारी करें, और विलंबता को रिकॉर्ड करें, या वापसी के लिए समय निर्धारित करें। यदि 20 सेकंड के भीतर कोई निकासी व्यवहार नहीं देखा जाता है, तो लार्वा एक गैर-उत्तरदाता है।

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