Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For å forberede Drosophila larver for en varmesondeanalyse, samle dyr av ønsket utviklingsstadium, og overfør enkle larver til en testplate med en tynn film av vann. Vannet gjør at larvene kan bevege seg fritt uten å holde seg til plateoverflaten.
Drosophila larver oppdager skadelige termiske stimuli gjennom multidendritiske sensoriske nevroner i deres epidermis kjent som nociceptorer. Disse avfyres ikke før en viss sensorisk terskel er nådd, for eksempel potensielt skadelige høye temperaturer.
Sett varmesonden til en temperatur som vil overvinne denne sensoriske terskelen, og få nociceptorene til å skyte. Trykk forsiktig spissen av sonden mot larven for å bruke varme. Larven vil reagere på den skadelige temperaturen med termo-nociceptiv oppførsel, trekke seg ut av sonden. Stopp når larven viser en 360-graders rolle borte fra varmesonden, eller når en definert tid har gått.
I eksempelprotokollen vil vi se en demonstrasjon av en lokalisert varmesondeanalyse på tidlig tredje instar Drosophila larver.
- Først forhåndsinnstiller du temperaturen på den termiske sonden til ønsket settpunkt. Bruk en pensel eller tang til å overføre en enkelt larve forsiktig til en flat plattform, og sørg for at lavaen er dekket av en tynn film av vann.
- For å minimere trykkvariasjonen, samt for å sikre riktig plassering og vinkel på varmesonden, gjør øvelsen perfekt.
- Trykk forsiktig sondespissen mot larven i segment A4, bruk lett trykk med spissen i omtrent 45 graders vinkel mellom sonden og larvens overflate. Trykket skal forårsake en liten innrykk på overflaten av larven, og vil vanligvis være tilstrekkelig for å forhindre bevegelse. Fortsett å stimulere larven til en abstinensrespons er utstilt eller til 20-sekunders avskjæringen er nådd.
Responderende larver viser vanligvis først en foreløpig oppførsel for å løfte hodet og halen, etterfulgt av tilbaketrekningsadferden ved å rulle minst 360 grader. Når abstinensadferden er initiert, frigjør du kontakt med sonden og registrerer ventetiden, eller tiden det tar å trekke seg tilbake. Hvis ingen abstinensadferd observeres innen 20 sekunder, er larven en ikke-responder.
