Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til at begynde med skal du fjerne hovedet fra en bedøvet voksenflyvning. Dæk den halshuggede flue med en opløsning, der indeholder Fosfat-Buffered Saline, eller PBS, og Bovine Serum Albumin, eller BSA, for at undgå udtørring. Hold fluen ved brystkassen med pincet, og træk derefter maven med et andet par pincet for at eksponere tarmen.
Når du er løsrevet, skal du trække afgrøden væk fra maven for at udfolde tarmen. Træk den bageste ende af fluen for at begynde at frigøre tarmen fra bughulen. Fortsæt med at trække tarmen for at trække hele vævet ud af maven. Når det er befriet, skal du fjerne foregut, malpighiske tubules, baggud og æggestokke for kun at efterlade den dissekerede midgut, det primære fordøjelsessted i fluen.
I eksempelprotokollen dissekerer vi midguts fra unge og gamle voksne fluer, der skal analyseres yderligere via Fluorescensaktiveret cellesortering eller FACS.
- Før du begynder dissektion, bedøve en hætteglas af 40 fluer med kuldioxid på en standard flyve seng. Derefter bruge et barberblad til at halshugge alle fluer og overføre dem til en dissektion parabol belagt med agarose gel. Hæld nok kold PBS plus BSA i fadet til at dække agarose. Fluerne vil flyde.
Derefter skal du for hvert insekt gribe en flyve underliv med et par pincet og brystkassen med en anden. Adskil brystkassen fra maven. Tarmen vil være synlig, og afgrøden vil sandsynligvis stadig være forbundet med brystkassen. Grib tarmen og træk den ud af brystkassen.
Dernæst skal du bruge en af pincet til at få fat i den bageste ende af maven, og den anden til at forstå kanten af den forreste åbne kutikula. Træk den bageste ende væk for at bryde neglebåndet, og fortsæt med at trække posteriorly meget forsigtigt, indtil hele tarmen er blevet trukket ud af bughulen. Fjern foregut, malpighian rør, hindgut og æggestokke, forlader den nøgne midgut.
Da midguts er isoleret, skal du bruge et glas Pasteur pipette til periodisk at overføre flere af tarmvævene ad gangen til et mikrocentrifugerør på 1,5 milliliter, der indeholder koldt PBS plus BSA på is.
