Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til å begynne med, fjern hodet fra en bedøvet voksenflue. Dekk den halshuggede fluen med en løsning som inneholder fosfatbufret saltvann, eller PBS, og Bovine Serum Albumin, eller BSA, for å unngå uttørking. Hold fluen ved thoraxen med tang, og trekk deretter magen med et annet par tang for å eksponere tarmen. Siden avlingen, eller matlagringssekken, vil bli festet til thoraxen, trekk forsiktig tarmen bort fra thoraxen.
Når du er løsrevet, trekk avlingen bort fra magen for å utfolde tarmen. Trekk av den bakre enden av flyet for å begynne å frigjøre tarmen fra bukhulen. Fortsett å tugging tarmen for å trekke hele vevet ut av magen. Når frigjort, fjern foregut, malpighian tubules, hindgut og eggstokkene for å forlate bare den dissekerte midgut, det primære stedet for fordøyelsen i fly.
I eksempelprotokollen vil vi dissekere midguts fra unge og gamle voksne fluer som skal analyseres videre via Fluorescence-Aktivert cellesortering, eller FACS.
- Før du begynner med disseksjonen, bedøv ett hetteglass med 40 fluer med karbondioksid på en standard flyseng. Bruk deretter et barberblad til å halshugge alle fluene og overfør dem til en disseksjonsfat belagt med agarosegel. Hell nok kald PBS pluss BSA inn i parabolen for å dekke agarose. Fluene vil flyte.
Deretter, for hvert insekt, ta i sin tur en flue underliv med ett par tang, og thoraxen med en annen. Skill thoraxen fra magen. Tarmen vil være synlig, og avlingen vil mest sannsynlig fortsatt være koblet til thoraxen. Ta tak i tarmen og trekk den ut av thoraxen. Deretter tar du tak i avlingen og trekker tarmen litt fremre bort fra magen for å utfolde den.
Deretter bruker du en av tangene til å gripe den bakre enden av magen, og den andre for å gripe kanten av den fremre åpne kutiklet. Trekk den bakre enden bort for å bryte kutikulær, og fortsett å trekke bakre veldig forsiktig, til hele tarmen er trukket ut av bukhulen. Fjern foregut, malpighiske rør, bakgut og eggstokkene, og la den nakne midgut.
Når midgutene er isolert, bruk en glass Pasteur pipette for å periodisk overføre flere av tarmvevene om gangen til et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør som inneholder kald PBS pluss BSA på is.
