הכנת לב דרוזופילה: טכניקה לחקר פיזיולוגיית הלב בזבוב הבוגר

- שונה מאשר בעלי חוליות, הלב Drosophila הוא חלק ממערכת מחזור הדם פתוח. הלב של זבוב מבוגר הוא מבנה דמוי צינור שנבנה קרדיומיוציטים המחובר לאפידרמיס על ידי שרירי אלרי מוטבע במטריצה חוץ תאית.

בחרקים, ההמולימפה משמשת הן כדם והן כנוזל ביניים, נושאת חומרים מזינים, מולקולות איתות ותאי חיסון.

בהכנת לב ניסיונית, ההמולמה המלאכותית מחקה תנאים פיזיולוגיים לשמירה על תפקוד הרקמות. למרות שהמולימפה טבעית אינה אחראית לחילופי גזים, ההמולימפה המלאכותית חייבת להיות מחומצנת היטב כדי להחליף את היעדר מערכת קנה הנשימה הפונקציונלית. בניסוי הבא אנו מדגימים הכנת לב שלם למחצה מעולם מבוגר להדמיה חיה או אלקטרופיזיולוגיה.

- לפני תחילת העבודה, אנו מכינים תחילה פתרון hemolymph מלאכותי. פתרון זה מכיל סוכרוז וטרהלוז, אשר יש להוסיף את hemolymph מלאכותי מפתרונות מלאי בקירור רק לפני השימוש כדי למנוע זיהום חיידקי.

לאחר מכן, למשוך כמה נימים בסדר באמצעות פולר פיפטה סטנדרטי, אשר יהיה צורך להסרת גופי שומן בזבוב.

לאחר שהכל הוכן, זבובים בוגרים חייבים להיות מורדמת. זה יכול להיעשות באמצעות חשיפה קצרה כדי לעוף תנומה במשך שתיים עד חמש דקות, אבל להיזהר לא להשאיר את הזבובים בתנומת זבוב יותר מחמש דקות. חשיפה לטווח קצר לקור יכול לשמש גם להרדים זבובים, אבל פחמן דו חמצני לא מומלץ שכן יש השפעות ארוכות טווח על קצב הלב וקצביות.

לאחר מכן, הזבובים המרופדים ממוקמים, צד הגב למטה, לתוך צלחת פטרי מצופה בשכבה דקה של ג'לי נפט. הקוטיקולה ההידרופובית בכנפיים ובגוף צריכה להידבק באופן הפוך לג'לי, אך ניתן למקם מחדש את הזבוב במידת הצורך.

הראש, חוט העצבים הגחוני, והרגליים מוסרות עם חתך אחד. לאחר החתך, ההכנה שקועה בתמיסת ההמולמה המלאכותית המחומצנת. באמצעות מספריים אביביים, הקצה האחורי של הבטן, המורכב מקטע בטן 7 ו -8, מוסר עם חתך אחד.

הכנס את להבי המספריים לתוך הפתח הקטן בקצה הבטן וחתך את הקוטיקל לרוחב.

הבטן ואיברי בטן אחרים בדרך כלל ניתן להסיר כמו מסה אחת באמצעות מלקחיים תכשיטנים ומשיכה עדינה. הסרת האיברים הפנימיים חושפת את צינור הלב הפועם, שעדיין מחובר לקוציקל הגבי על ידי שרירי אלרי קטנים ומוקף בגופי שומן. הנימים הנמשכים מוחדרים לפלסטיק, צינורות בגודל 1/16 אינץ' המחוברים למקור ואקום.

לאחר הגדרת, מערכת יניקה זו משמשת כדי למצוץ שומן עודף מרחבי צינור הלב. זה יכול לשמש גם כדי להסיר בועות אוויר המצטברות סביב הקוטיקולה וכל פסולת.

במידת הצורך, ניתן למקם מחדש את הקוטיקל והלב המצורף על ידי הרמת הקוטיקל בעדינות מתוך ג'לי הנפט ולאלף אותו בזהירות בחזרה למטה, שוב הימנעות מכל מגע עם רקמת הלב. בשלב זה, הפתרון רחצה ההכנה צריכה להיות מוחלפת עם hemolymph טרי, מלאכותי. הכנה זו צריכה להיות מותרת כדי להשוות במשך 20 עד 30 דקות עם חמצון לפני כל מניפולציות. אם ההכנה היא להישמר במשך יותר מ 60 דקות, זה צריך להיות מועשר מחדש עם hemolymph מלאכותי טרי. משמש גם להקלטה אלקטרופיזיולוגית או למניפולציות היסטולוגיות.