Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Diferente que en los vertebrados, el corazón de Drosophila es parte de un sistema circulatorio abierto. El corazón de una mosca adulta es una estructura similar a un tubo construida a partir de cardiomiocitos que está conectado a la epidermis por los músculos alarios e incrustado en la matriz extracelular.
En los insectos, la hemolífago sirve como sangre y líquido intersticial, transportando nutrientes, moléculas de señalización y células inmunes.
En una preparación experimental del corazón, el hemolífilo artificial imita las condiciones fisiológicas para preservar la función tisular. Aunque la hemolífafa natural no es responsable del intercambio de gas, la hemolífago artificial debe estar bien oxigenada para sustituir la falta de un sistema traqueal funcional.
- Antes de comenzar, primero preparamos una solución de hemolífanos artificiales. Esta solución contiene sacarosa y trehalosa, que debe añadirse a la hemolífago artificial de soluciones de stock refrigeradas justo antes de su uso con el fin de prevenir la contaminación bacteriana.
A continuación, tire de varios capilares finos utilizando un tirador de pipeta estándar, que será necesario para la eliminación de cuerpos de grasa en la mosca.
Una vez que todo ha sido preparado, las moscas adultas deben ser anestesiadas. Esto se puede hacer usando una breve exposición a la siesta volante durante dos a cinco minutos, pero tenga cuidado de no dejar las moscas en la siesta de mosca más de cinco minutos.
A continuación, se colocan las moscas anestesiadas, Lado dorsal hacia abajo, en una placa de Petri recubierta con una fina capa de vaselina. La cutícula hidrofóbica en las alas y el cuerpo debe pegarse invertiblemente a la vaselina, pero la mosca se puede reposicionar si es necesario.
La cabeza, el cordón nervioso ventral y las piernas se retiran con un solo corte. Una vez cortada, la preparación se sumerge en la solución de hemolífanos artificiales oxigenadas. Usando tijeras de resorte, la punta posterior del abdomen, que se compone de segmento abdominal 7 y 8, se elimina con un solo corte.
Inserte las cuchillas de las tijeras en la pequeña abertura en la punta del abdomen y corte la cutícula lateralmente. Esto libera un borde de la cutícula ventral.
El intestino y otros órganos abdominales generalmente se pueden extraer como una sola masa usando fórceps joyeros y tugging suave. La extracción de los órganos internos revela el tubo cardíaco palpitante, que todavía está unido a la cutícula dorsal por pequeños músculos alarios y está rodeado de cuerpos de grasa. Los capilares tirados se insertan en plástico, tubos de 1/16 pulgadas unidos a una fuente de vacío.
Una vez configurado, este sistema de succión se utiliza para succionar el exceso de grasa de alrededor del tubo cardíaco. También se puede utilizar para eliminar las burbujas de aire que se acumulan alrededor de la cutícula y cualquier residuo.
Si es necesario, la cutícula y el corazón unido se pueden reposicionar levantando suavemente la cutícula de la vaselina y domándola cuidadosamente hacia abajo, evitar de nuevo cualquier contacto con el tejido cardíaco. En este punto, la solución que baña la preparación debe ser reemplazada por hemolífago fresco y artificial. Esta preparación debe ser permitida para equilibrar durante 20 a 30 minutos con oxigenación antes de cualquier manipulación. también se utiliza para la grabación electrofisiológica o para manipulaciones histológicas.
