Berigelse for mænd: Vedligeholdelse af en bestand af mandlige C. elegans

- C. elegans forekommer i to køn: hermafroditter, som har to X-kromosomer, og hanner, som kun har et X-kromosom kaldet XO eller X null.

Hermafroditter producerer både oocytter og sædceller og kan reproducere ved selvbefrugtning. Næsten alle deres gameter bærer et X-kromosom, så afkom, der skyldes selvbefrugtning, er for det meste hermafroditter.

Sjældent går X-kromosomet tabt under gametogenese, hvilket resulterer i mandlige afkom kun omkring 0,1 til 0,2% af tiden. Dette er ikke en praktisk måde at samle nok mænd til ethvert eksperiment eller genetisk kryds, som vi har brug for dem til.

I stedet kan vi lave en hermafrodit med en mand, der resulterer i, at omkring halvdelen af afkommet er mand. Når vi udfører dette genetiske kryds, skal du sørge for at inkludere flere mænd end hermafrodit for at sikre effektiv parring. I følgende eksempel vil vi oprette en parringsplade og isolere mandlige orme som forberedelse til at indsamle og studere spermatids in vitro.

- Først opnå et stort antal mænd ved at krydse fem wildtype hanner og en hermafrodit på en lille græsplæne af E. coli OP50 bakterier seedet i midten af en nematode vækst medium eller NGM plade. Omkring 50% af den næste generation vil være wildtype hanner.

For at indsamle L4-stadiehanner skal du undersøge udviklingsstadiet og halemorfologi under et dissekerende mikroskop. En L4-stadieorm plukkes baseret på halemorfologi. En mandlig orm har en afrundet hale, mens en hermafrodit har en spids hale.

Ved hjælp af en platintråd skal du vælge 7 til 10 L4-trins hanner pr. eksperiment og overføre dem til NGM-plade seedet med OP50 og lade dem vokse i en dag eller to. Voksende cølibathanner i mangel af hermafrodit forhindrer tab af sæd, og dermed vil et stort antal spermatids være tilgængelige under forsøgsproceduren.