Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- התחל עם ביצים כדוריות שבודדו על ידי הלבנת תולעים בוגרות מגרדות.
לאחר תקופת עיכול מתאימה, בעדינות צנטריפוגה הביצים ולהחליף את supernatant עם מדיום תרבות התא כדי לעצור את העיכול. לאחר מכן, להעביר את העוברים דרך מחט 18-מד כדי להפריד באופן מכני תאים בודדים. הבא, לסנן את הפתרון כדי להסיר פסולת מן קליפת הביצה או גושים תאים לא נפרדים.
בפרוטוקול הדוגמה, נכין תאים עובריים לבידול וניתוח מורפולוגי במבחנה.
- תוך כדי עבודה תחת מכסה המנוע זרימה למינארי כדי למנוע החדרת זיהום חיידקי, מוציאים מחדש את הביצים המרופדות במיליליטר אחד של שני מיליגרם למיליליטר ומעבירים אותן לצינור חרוט טרי של 15 מיליליטר.
לאחר הסרתו בזהירות של בעל-טבעי, להוסיף שלושה מיליליטר של L15 בינוני. להעביר את הביצים לתוך צלחת בקוטר שישה סנטימטרים ולהתחיל ניתוק ידני באמצעות מזרק סטרילי 10 מיליליטר עם מחט 18-מד. כדי לפקח על מידת הדיסוציאציה, למקם טיפת השעיה לתוך צלחת פטרי טרי ולהציג תחת מיקרוסקופ.
כדי להסיר גושי תאים, ביצים לא מעוכלות, ותזחלים בקעו, בעדינות לסנן את המתלים באמצעות מסנן חמש מיקרון ולהפעיל נוסף ארבעה עד חמישה מיליליטר של L15 בינוני דרך המסנן כדי לשחזר את התאים. כדי לתרבת את התאים לאחר צנטריפוגה הסינון ב 900 גרם במשך שלוש דקות, להשעות מחדש את התאים L15 בינוני מלא. צלחת מיליליטר אחד לבאר, ולאחסן צלחות בתא אטום לח ב 20 מעלות צלזיוס באוויר הסביבה.
