酵素消化と手動解離:細胞培養のための C.エレガンス 胚を準備する方法

- グラビッド成虫を漂白して単離したペレット卵から始める。培養細胞の汚染を避けるために、この手順の各ステップが無菌で行われることを確認してください。

適切な消化期間の後、卵を穏やかに遠心分離し、上澄みを細胞培養培地に置き換えて消化を止める。その後、胚を18ゲージの針を通して機械的に分離された個々の細胞に渡す。次に、卵殻または未分離の細胞塊から破片を取り除くために溶液を濾過する。

このプロトコル例では、インビトロ形態分化と解析のための胚細胞を準備する。

- 細菌汚染を避けるために層状流れフードの下で働いている間、ペレット化された卵を1ミリリットルのキチナーゼあたり2ミリグラムで再中断し、新鮮な15ミリリットルの円錐形チューブに移します。

上澄みを慎重に取り除いた後、L15培地の3ミリリットルを加え、卵を直径6センチメートルのプレートに移し、18ゲージの針で10ミリリットルの滅菌注射器を使用して手動解離を開始します。

セルの束を削除するには、未消化の卵と孵化した幼虫は、5ミクロンのフィルターを通してサスペンションを静かに濾過し、フィルターを通してさらに4〜5ミリリットルのL15培地を実行して細胞を回収します。