Encyclopedia of Experiments: Biology
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- सामना करना पड़ा स्थितियों की भावना बनाने के लिए और तदनुसार उन्हें जवाब देने के लिए, कीड़ा सी elegans, दूसरों के बीच, एक उच्च विकसित रसायन प्रणाली विभिन्न रसायनों की एक विस्तृत विविधता का पता लगाने में सक्षम है।
सिर में संवेदी न्यूरॉन्स, एम्फीड और इनर लैबियल न्यूरॉन्स, साथ ही पूंछ में न्यूरॉन्स, फेसमिड न्यूरॉन्स, या तो सीधे या अप्रत्यक्ष रूप से बाहर की स्थितियों के लिए छल्ली के माध्यम से उजागर कर रहे हैं । ये केमोसेन्सरी न्यूरॉन्स कोड प्रासंगिक जानकारी कीड़ा द्वारा इस्तेमाल के लिए एक उपयुक्त व्यवहार प्रतिक्रिया का उत्पादन: एक व्यवहार कीमोटैक्सिस कहा जाता है ।
अस्थिर गंध या तेज पानी में घुलनशील संकेतों के लिए रसायनीय प्रतिक्रिया का परीक्षण करने के लिए, वांछित विकास के चरण के कीड़े को अलग करें और उन्हें पहले से तैयार प्रायोगिक क्षेत्र पर परीक्षण रसायन के संपर्क में रखें । जब एक जीवाणु खाद्य स्रोत द्वारा उत्पादित उन लोगों की तरह अनुकूल रसायनों के संपर्क में, सी Elegans स्रोत की ओर सकारात्मक कीमोटैक्सिस प्रदर्शित करता है ।
इसके विपरीत, जब भारी धातुओं जैसे कम अनुकूल या जहरीले रसायनों के संपर्क में आता है, तो कीड़ा नकारात्मक केमोटैक्सिस प्रदर्शित करता है, जो रसायन से बचता है । इसलिए, घ्राण या गुस्ताख़ म्यूटेंट प्रतिकूल रसायनों से बचने में विफल रहते हैं और जंगली प्रकार के जानवरों के विपरीत प्रतिकूल परिस्थितियों में रहते हैं जो प्रतिकूल स्थिति से बचते हैं ।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम एक केमोटैक्सिस परख का प्रदर्शन देखेंगे, जो तांबे के लिए कीड़ा के घृणा का परीक्षण करेगा।
- रात भर इनक्यूबेशन के बाद, इनक्यूबेटर से प्लेटों को हटाएं और एक गाइड के रूप में प्लेट के चिह्नित नीचे का उपयोग करके, एक बाहरी तांबे की बाधा बनाने के लिए एगर के किनारे पर हौसले से तैयार 0.5 मोलर कॉपर दो सल्फेट समाधान के पिपेट 100 माइक्रोलीटर।
सुनिश्चित करें कि तांबे के दो सल्फेट समाधान बैक्टीरियल पैच से संपर्क नहीं करता है, और तांबे के समाधान को प्लेट पर सूखने की अनुमति देता है। प्लेट के किनारे के पास के समाधान को हल्के से डबिंग करके प्रयोगशाला के ऊतकों के साथ स्थानांतरण के बाद हर पांच मिनट में सूखापन की जांच करें।
परख से तुरंत पहले, प्रायोगिक जीवों को बैक्टीरिया मुक्त आगर प्लेट में स्थानांतरित करें और अतिरिक्त बैक्टीरिया को हटाने के लिए एक मिनट के लिए निमाटोड को स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने की अनुमति दें।
इसके बाद, युवा वयस्कों के साथ प्लेट पर एम 9 के 1 मिलीलीटर जिन्हें 24 घंटे पहले स्थानांतरित किया गया था ताकि कीड़े को माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में धोया जा सके। एक मिनट के लिए 3,000 बार जी पर निमाटोड को सेंटीफ्यूज करें।
कीड़े को ट्यूब के नीचे एक गोली बनानी चाहिए। कीड़ा गोली को बाधित किए बिना एम9 समाधान को एस्पिरेट करें। 1 मिलीलीटर M9 समाधान को कृमि गोली में जोड़ें। वर्ट ट्यूब को हल के साथ कीड़े को मिलाने के लिए।
यदि अतिरिक्त बैक्टीरिया को शुरू में कीड़े के साथ स्थानांतरित किया गया था, तो कुल पांच बार दोहराएं। अंतिम धोने के बाद, एम9 समाधान के 100 माइक्रोलीटर तक सुपरनेट को एस्पिरेट करें और कीड़ा गोली बनी हुई है। धोने के कदम पूरा होने के बाद तुरंत समाधान से कीड़े स्थानांतरित करें।
पाइपेट ट्यूब के नीचे से कीड़ा गोली के 20 माइक्रोलीटर परख प्लेट के बैक्टीरिया मुक्त आधे पर। 10 कीड़े परख प्लेट में स्थानांतरित कर रहे हैं और कोई दूषित भोजन मौजूद नहीं है। कोई बैक्टीरिया तांबे के भोजन की दौड़ प्लेटों में स्थानांतरित नहीं किया जाना चाहिए।
एक मिनट के भीतर प्रयोगशाला के ऊतकों के साथ सूत्रकृमि से अतिरिक्त M9 समाधान निकालें। सुनिश्चित करें कि M9 समाधान तांबे के दो सल्फेट समाधान से संपर्क नहीं करता है, और कीड़े और आगर सतह बरकरार रहते हैं। कीड़े को छोड़ दें जिन्हें गलती से प्रयोगशाला ऊतकों के साथ हटा दिया गया है।
एक बार M9 समाधान हटा दिया गया है और सभी कीड़े गैर तरल लोकोमोटर पैटर्न शुरू कर दिया है, यानी जब वे पिटाई बंद कर दिया है, परख स्टॉपवॉच शुरू करते हैं । यदि अतिरिक्त कीड़े गलती से शामिल थे, उंहें हेलोकार्बन तेल के साथ उठा द्वारा हटा दें सुनिश्चित करें कि कोई बैक्टीरिया थाली में जोड़ रहे हैं ।
हर 30 मिनट में परख प्लेटों की जांच करें। बैक्टीरियल पैच वाली परख प्लेटों के लिए, यदि वे चार घंटे की अवधि में भोजन पैच तक पहुंच जाते हैं तो सकारात्मक रूप से जीवों को स्कोर करते हैं । नकारात्मक नियंत्रण प्लेटों के लिए, सकारात्मक स्कोर जीवों अगर वे बाधा पार कर लिया है ।
