Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Sem estímulos sensoriais, o movimento de C. elegans é geralmente para a frente e é interrompido por reversões e voltas -- manobras de reorientação aleatória que resultam em uma mudança de direção. C. elegans são eletroreceptivos. Ou seja, eles podem sentir campos elétricos. Quando expostos a uma leve corrente direta ou DC, os vermes se movem em um caminho ininterrupto na direção do eletrodo negativo ou catódo, um comportamento chamado eletrotaxis.
Para observar com mais precisão a locomoção do verme, coloque o animal em um dispositivo microfluido e aplique um campo elétrico DC. Inverter a direção do campo, e o verme vai girar no sentido oposto- em direção à direção do cátodo. Aplique uma corrente alternada, AC, e o verme vai parar. A mudança alternada na direção do campo sobrecarrega os sistemas neuromotores do verme, resultando na imobilização do verme.
No protocolo de exemplo a seguir, veremos uma configuração demonstrando um ensaio eletrotaxista em um dispositivo microfluido.
- Inicie esta etapa colocando o microcanal apenas montado em um estágio xy-móvel de um microscópio com uma câmera montada conectada a um monitor. Conecte a fonte de alimentação aos eletrodos do microcanal.
Depois de confirmar que a resistência do microcanal é em torno de 0,6 mega-ohms, conecte o tubo de saída do microcanal a uma seringa descartável. Em seguida, submergir a boca do tubo de entrada em uma solução de nematoides suspensos no tampão fisiológico M9. Aplique pressão negativa dentro da seringa para aspirar líquido no canal.
Quando os tubos de entrada e saída estiverem cheios, desconectar a seringa e manipular hidroestáticamente o fluxo ajustando a altura relativa do tubo para colocar um verme no centro do canal. Em seguida, coloque ambos os tubos planos na mesma elevação. Para manter o fluxo zero dentro do microcanal ao trocar amostras de vermes durante um experimento de eletrotáxi, depois de nivelar ambos os tubos de entrada para a mesma elevação, se ainda houver fluxo faça pequenos ajustes na altura do tubo em relação um ao outro.
- Se alguma vez não temos certeza se o fluxo é realmente zero, podemos induzir uma reversão no movimento do verme alterando a polaridade do campo elétrico e, em seguida, avaliando a velocidade linear do verme à medida que ele se vira.
- Agora, defina a fonte de alimentação para a tensão apropriada. Ative o sinal elétrico e permita que um minuto de pré-exposição para o verme se aclimate ao campo, durante o qual o verme deve começar a se mover em direção ao cátodo.
Quando o experimento estiver concluído, remova todo o líquido e os vermes do canal. Enxágue a câmara com água desalionizada e deixe o dispositivo em uma placa quente a 125 graus Celsius para secar.
