Elektrotaxisanalys: En metod för att observera rörelse i C. elegans

- Utan sensoriska stimuli är C. elegans-rörelsen i allmänhet framåt och avbryts av omkastningar och svängar - slumpmässiga omorienteringsmanövrar som resulterar i en riktningsändring. C. elegans är elektroreceptiva.

För att mer exakt observera maskens rörelse, placera djuret i en mikrofluidisk enhet och applicera ett dc-elektriskt fält. Vänd fältets riktning, och masken kommer att vända motsatt väg - mot katodens riktning. Applicera en växelström, AC och masken kommer att sluta. Den alternerande förändringen i fältets riktning överväldigar maskens neuromotoriska system, vilket resulterar i maskens immobilisering.

I följande exempelprotokoll kommer vi att se en installation som visar en elektrotaxisanalys i en mikrofluidisk enhet.

- Börja det här steget genom att placera den just monterade mikrokanalen på ett xy-rörligt mikroskopstadium med en monterad kamera ansluten till en bildskärm.

Efter att ha bekräftat att mikrokanalens motstånd är cirka 0,6 mega-ohm, fäst mikrokanalens utgångsrör på en engångsspruta.

När inlopps- och utloppsrören båda är fyllda, koppla bort sprutan och hydrostatiskt manipulera flödet genom att justera rörets relativa höjd för att placera en mask i mitten av kanalen.

- Om vi någonsin är osäkra på om flödet verkligen är noll, kan vi inducera en omsvängning i maskens rörelse genom att ändra polariteten i det elektriska fältet och sedan utvärdera maskens linjära hastighet när den vänder.

- Ställ nu in strömförsörjningen på lämplig spänning. Aktivera den elektriska signalen och låt en minuts förexponering för masken acklimatisera sig till fältet, under vilken tid masken ska börja röra sig mot katoden. När minuten har gått, börja spela in.

När experimentet är klart, ta bort all vätska och maskar från kanalen. Skölj kammaren med avjoniserat vatten och lämna enheten på en värmeplatta vid 125 grader Celsius för att torka.