Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- لتقييم الحركة في C. elegans، استخدم كاميرا لتسجيل حركة الديدان على لوحة أجار، وضمان الإضاءة حتى من لوحة أثناء التسجيل.
ضع العديد من الحلقات النحاسية على لوحة واحدة لتتبع الديدان في كل حلقة في وقت واحد.
في بروتوكول المثال ، سنرى عرضا توضيحيا لفحص تتبع الحركة الذي يختبر آثار الكحول على سرعة حركة الدودة.
- للبدء، يستغرق نقل 10 ديدان من كل مجموعة تجريبية دقيقتين أو أقل إلى مركز حلقة نحاسية على طبق تأقلم.
دع كل لوحة تأقلم تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
- السرعة التي يتم بها نقل الحيوانات في هذه الخطوة مهمة جدا، لأن الحيوانات المنقولة ستتعرض للإيثانول لفترة أطول.
- مطلوب مجهر مع كاميرا فيديو عالية الدقة لتصوير الديدان الآن. حتى الإضاءة ، مثل من الإضاءة الخلفية المربعة مقاس ثلاثة بوصات ، أمر حيوي للتحليل.
قم بإعداد برنامج تحليل الصور لالتقاط 120 إطارا و12 بتا وتدرجا رماديا وأفلاما فاصلة زمنيا في إطار واحد في الثانية.
الآن تسجيل أفلام لمدة دقيقتين من كل لوحة، 10 دقائق بعد أن وضعت الديدان الماضي على تلك اللوحة. ثم جعل تسجيل الثانية لمدة دقيقتين، 30 دقيقة بعد وضع الديدان على لوحة.
أولا تطبيق عامل تصفية على الصور التي تتسطح الخلفية ويعزز التباين من الكائنات دودة. تحت القائمة، حدد عملية، ثم المرشحات، ثم تحسين، ومن ثم تسطيح. تعيين المعلمة لخلفية داكنة وعرض ميزة 20 Pix.
الآن ، قم بتحليل حركة الحيوانات في كل حلقة بشكل منفصل مع منطقة دائرية ذات أهمية تتداخل مع الحلقة النحاسية.
في إطار جدول بيانات التتبع، استخدم زر خيارات التتبع للسماح باستبعاد مسارات محددة والحد من أي قطع أثرية تجريبية.
تعيين الحد الأدنى من طول المسار الإجمالي إلى 400 ميكرون، وتعيين نوع الحركة السائدة إلى الفوضى. ثم تحت المعلمة المسار، تعيين الكائنات للسماح المسارات الجزئية أن يكون الحد الأدنى من طول 21 إطارات ويكون عمق إسقاط تتبع إطار واحد.
الآن، لبدء عملية التعقب، انقر أولا فوق الزر البحث عن جميع المسارات تلقائيا. وهذا يجلب مربع الحوار خيارات العد/الحجم ومربع حوار التتبع. حدد الخيار يدوي لتحديد نطاق الكثافة في مربع الحوار Count/Size. وهذا يوفر خطوة عتبة مهمة. ثم يضبط أشرطة التمرير عتبة الكثافة لإنشاء نطاق شامل يسلط الضوء على الكائنات الداكنة. نقطة انطلاق جيدة على المقياس بين 0 إلى 1500.
الآن تطبيق عامل تصفية حجم لاستبعاد الكائنات التي هي أكبر أو أصغر من دودة واحدة. انتقل إلى القائمة قياس، ومن ثم حدد قياس القائمة الفرعية. وهذا يفتح مربع الحوار خيارات العد / الحجم. هناك، تعيين نطاق المنطقة إلى 28،000 إلى 120،000 ميكرون مربع.
الآن، أكمل عملية التتبع بالنقر فوق Continue في مربع حوار التتبع. تحقق مرتين من أن مسارات الإخراج مع لقطات الفيلم. تأكد من تمثيل كل دودة ما لم يكن هناك سبب واضح لصفيتها.
بعد ذلك، احسب سرعة كل دودة عن طريق متوسط المسافة المقطوعة بين كل إطار أو كل ثانية، وخلق متوسط سرعة للمسارات في كل مجموعة سكانية.
