C. 埃莱甘斯 运动跟踪：评估蠕虫运动的方法

-要评估 C. elegans 的运动，请使用相机记录蠕虫在 agar板上的运动，确保在录制过程中甚至照亮板。 要限制蠕虫在板周围的移动，请使用铜环。 铜对C. elegans 具有反作用，因此蠕虫在环内缠绕。

将几个铜环放在一个板上，同时跟踪每个环中的蠕虫。这允许在相同的条件下对控制和实验动物进行评估，减少日常变化，并允许并排比较。记录蠕虫在设定的时间间隔内的移动，并使用计算机软件分析机车行为的特征，如移动速度和行驶距离。

在示例协议中，我们将看到一个运动跟踪检测的演示，测试酒精对蠕虫运动速度的影响。

- 首先，花两分钟或更短的时间将每个实验组的10只蠕虫转移到适应板上的铜环中心。这是一个没有乙醇的盘子。避免用蠕虫转移食物，因为它会减少它们的运动。 也避免损坏阿加表面，因为蠕虫会挖洞。 记录加载到板上的时间，并确保将蠕虫转移到每个板上超过两分钟，以便每个板可以在适当的时间间隔内单独拍摄。

让每个适应板在室温下孵育30分钟。 然后，将蠕虫转移到检测板中，按照用于将蠕虫放在适应板上的顺序进行。 使用无细菌的薄边扁平蠕虫采摘，使用铲取运动收集扁平采摘顶部的蠕虫。然后，用实验室膜密封板，以尽量减少乙醇蒸发的损失。

- 在这个步骤中动物的转移速度非常重要，因为转移的动物将暴露在乙醇中的时间更长。 因此，最好先在实验复制品中旋转放置在盘子上的菌株。

-现在需要一台带高分辨率摄像机的显微镜来拍摄蠕虫。即使是照明，例如来自三英寸方形背光的照明，对于分析也至关重要。然后，为了保持对比度，将板介质映像向上。

准备图像分析软件，以每秒一帧的速度捕捉 120 帧、12 位、灰度、延时电影。 为了减少输出文件的大小，同时仍保留足够的图像分辨率，请使用二乘二的装箱模式。

现在从每个盘子录制两分钟的电影，在最后一个蠕虫被放置在盘子上10分钟后。然后进行第二次两分钟的录制，在蠕虫被放置在板上 30 分钟后。 对于此演示，使用 Image-Pro Plus 软件，因为各种其他软件可以适应该技术。 将电影分析为两分钟的片段。

首先将过滤器应用于将背景夷为平地的图像，并增强蠕虫对象的对比度。在菜单下，选择"过程"，然后筛选，然后增强，然后平整。设置暗背景和 20 Pix 功能宽度的参数。

现在，用一个与铜环重叠的圆形感兴趣区域，分别分析每个环中动物的运动。

在"跟踪数据表"窗口中，使用"跟踪选项"按钮将特定轨道排除在外，并限制任何实验物。在自动跟踪选项卡下，将轨道参数设置为每帧 400 微米的速度限制。将加速限制设置为自动。

将最小总轨道长度设置为 400 微米，并将主要运动类型设置为混沌。然后在轨道参数下，设置对象，使部分轨道的最小长度为 21 帧，并具有一帧的跟踪投影深度。

现在，要启动跟踪过程，请首先单击"查找所有曲目"自动功能按钮。 这将弹出计数/大小选项对话框和跟踪对话框。 在计数/大小对话框中选择强度范围选择的手动选项。 这提供了一个重要的阈值步骤。 然后调整强度阈值滑块，以创建一个突出显示深色对象的包容性范围。比例尺上的良好起点在 0 到 1，500 之间。

现在应用大小过滤器来排除大于或小于单个蠕虫的对象。 转到"测量"菜单，然后选择"测量子"菜单。 这将打开计数/大小选项对话框。 在那里，将区域范围设置为 28，000至 120，000 平方微米。 并将周界范围设置为 600 到 2，500 微米。 使用异常大小的蠕虫时，对这些参数进行调整。

现在，通过单击"继续"在跟踪对话框中完成跟踪过程。仔细检查输出是否与电影素材一起跟踪。除非有明确的理由过滤它，否则请确保表示每种蠕虫。然后，手动删除非蠕虫对象生成的曲目。

接下来，通过平均每帧或每秒之间的距离来计算每个蠕虫的速度，并为每个种群的轨道创建平均速度。