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Encyclopedia of Experiments: Biology

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C. एलिगेंस आंदोलन ट्रैकिंग

 
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C. एलिगेंस आंदोलन ट्रैकिंग: कीड़े में लोकोमोशन का आकलन करने के लिए एक विधि

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- सी एलिगेंस में लोकोमोशन का आकलन करने के लिए, एक कैमरे का उपयोग एक आगर प्लेट पर कीड़े के आंदोलन को रिकॉर्ड करने के लिए, रिकॉर्डिंग के दौरान प्लेट की रोशनी को भी सुनिश्चित करने के लिए। प्लेट के चारों ओर कीड़े के आंदोलन को प्रतिबंधित करने के लिए, तांबे के छल्ले का उपयोग करें। तांबा सी एलिगेंस के लिए अवार्णित है, इसलिए कीड़े छल्ले के भीतर संक्षारित होते हैं।

प्रत्येक अंगूठी में कीड़े को एक साथ ट्रैक करने के लिए एक प्लेट पर कई तांबे के छल्ले रखें। यह नियंत्रण और प्रयोगात्मक जानवरों के मूल्यांकन को समान परिस्थितियों में प्रदर्शन करने की अनुमति देता है, दिन-प्रतिदिन परिवर्तनशीलता को कम करता है और साथ-साथ तुलना के लिए अनुमति देता है। निर्धारित समय अंतराल पर कीड़े के आंदोलन को रिकॉर्ड करें, और लोकोमोटिव व्यवहार की विशेषताओं का विश्लेषण करने के लिए कंप्यूटर सॉफ्टवेयर का उपयोग करें, जैसे आंदोलन और दूरी की यात्रा की गति।

उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम एक आंदोलन ट्रैकिंग परख का प्रदर्शन देखेंगे जो कीड़ा की लोकोमोशन गति पर शराब के प्रभावों का परीक्षण करेगा।

- शुरू करने के लिए, प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह से 10 कीड़े को एक अभिनंदन प्लेट पर तांबे की अंगूठी के केंद्र में स्थानांतरित करने के लिए दो मिनट या उससे कम समय लें। यह एक प्लेट है जिसमें इथेनॉल नहीं है। कीड़े के साथ भोजन स्थानांतरित करने से बचें क्योंकि इससे उनकी गति कम हो जाएगी। इसके अलावा आगर की सतह को नुकसान पहुंचाने से बचें क्योंकि कीड़े बिल होंगे। प्लेट पर लोड होने के समय रिकॉर्ड करें, और प्रत्येक प्लेट में कीड़े के हस्तांतरण को दो मिनट से अधिक तक डगमगाते रहें, इसलिए प्रत्येक प्लेट को उचित समय अंतराल पर व्यक्तिगत रूप से फिल्माया जा सकता है।

प्रत्येक अभिनंदन प्लेट को कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करने दें। फिर, कीड़े को परख प्लेट में स्थानांतरित करें, आदेश के बाद कीड़े को एक्सीलेंट प्लेट पर रखें। बैक्टीरिया के बिना एक पतली धार वाले चपटे कीड़े को लेने के लिए, एक स्कूपिंग गति का उपयोग करके चपटे पिकअप के शीर्ष पर कीड़े एकत्र करें। फिर, वाष्पीकरण के लिए इथेनॉल के नुकसान को कम करने के लिए प्रयोगशाला फिल्म के साथ प्लेट को सील करें।

- जिस गति से जानवरों को इस कदम पर स्थानांतरित किया जाता है, वह बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि स्थानांतरित जानवरों को अब इथेनॉल के संपर्क में किया जाएगा। तो यह एक अच्छा विचार है कि कौन से उपभेदों को पहले प्रायोगिक प्रतिकृति में प्लेट पर रखा जाता है।

- अब कीड़े को फिल्माने के लिए हाई रिज़ॉल्यूशन वीडियो कैमरा के साथ एक माइक्रोस्कोप की आवश्यकता होती है। यहां तक कि रोशनी, जैसे कि तीन इंच वर्ग बैकलाइट से, विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण है। फिर, इसके विपरीत बनाए रखने के लिए, प्लेट मीडिया की ओर छवि।

एक फ्रेम प्रति सेकंड में 120 फ्रेम, 12-बिट, ग्रेस्केल, टाइम-लैप्स फिल्मों को कैप्चर करने के लिए इमेज एनालिसिस सॉफ्टवेयर तैयार करें। आउटपुट फाइल के आकार को कम करने के लिए, जबकि अभी भी पर्याप्त इमेज रेजोल्यूशन को बनाए रखते हुए, दो-बाय-टू बिनिंग मोड का उपयोग करें।

अब प्रत्येक प्लेट से दो मिनट की फिल्में रिकॉर्ड करें, 10 मिनट बाद अंतिम कीड़े उस प्लेट पर रखे गए थे फिर एक दूसरी दो मिनट की रिकॉर्डिंग करें, 30 मिनट बाद कीड़े प्लेट पर रखे गए थे इस प्रदर्शन के लिए इमेज-प्रो प्लस सॉफ्टवेयर का इस्तेमाल किया जाता है, क्योंकि अन्य सॉफ्टवेयर की एक विस्तृत विविधता तकनीक के अनुकूल हो सकती है फिल्मों का विश्लेषण दो मिनट के खंडों के रूप में

सबसे पहले उन छवियों पर फ़िल्टर लगाएं जो पृष्ठभूमि को समतल करती हैं और कृमि वस्तुओं के विपरीत को बढ़ाती हैं। मेनू के तहत, प्रक्रिया का चयन करें, फिर फ़िल्टर करें, फिर बढ़ाना, और फिर समतल करें। एक अंधेरे पृष्ठभूमि और 20 पिक्स सुविधा चौड़ाई के लिए पैरामीटर सेट करें।

अब, प्रत्येक अंगूठी में जानवरों के लोकोमोशन का अलग-अलग ब्याज के एक परिपत्र क्षेत्र के साथ विश्लेषण करें जो तांबे की अंगूठी को ओवरलैप करता है। उपाय उप-मेनू के तहत ट्रैक ऑब्जेक्ट्स कमांड के साथ कीड़े को पहचानें और ट्रैक करें।

ट्रैकिंग डेटा टेबल विंडो में, विशिष्ट पटरियों को बाहर रखने और किसी भी प्रयोगात्मक कलाकृतियों को सीमित करने की अनुमति देने के लिए ट्रैकिंग विकल्प बटन का उपयोग करें। ऑटो ट्रैकिंग टैब के तहत, ट्रैक पैरामीटर को प्रति फ्रेम 400 माइक्रोन की वेग सीमा तक सेट करें। त्वरण सीमा को स्वचालित तक सेट करें।

न्यूनतम टोटल ट्रैक की लंबाई 400 माइक्रोन तक सेट करें, और प्रमुख मोशन टाइप को अराजक सेट करें। इसके बाद ट्रैक पैरामीटर के तहत, आंशिक ट्रैक की न्यूनतम लंबाई 21 फ्रेम रखने और एक फ्रेम की ट्रैकिंग प्रोजेक्शन गहराई रखने की अनुमति देने के लिए ऑब्जेक्ट्स सेट करें।

अब ट्रैकिंग प्रक्रिया शुरू करने के लिए सबसे पहले फाइंड ऑल ट्रैक्स के स्वचालित रूप से फंक्शन बटन पर क्लिक करें। यह काउंट/साइज ऑप्शन डायलॉग बॉक्स और ट्रैकिंग डायलॉग बॉक्स लाता है काउंट/साइज डायलॉग बॉक्स में तीव्रता रेंज चयन के लिए मैनुअल विकल्प चुनें यह एक महत्वपूर्ण दहलीज कदम प्रदान करता है फिर डार्क ऑब्जेक्ट्स को हाइलाइट करने वाली समावेशी रेंज बनाने के लिए तीव्रता थ्रेसहोल्ड स्लाइडर्स को समायोजित करता है । स्केल पर एक अच्छा शुरुआती बिंदु 0 से 1,500 के बीच है

अब एक ही कीड़े से बड़ी या छोटी वस्तुओं को बाहर करने के लिए एक आकार फिल्टर लागू करें। उपाय मेनू पर जाएं, और फिर माप उप मेनू का चयन करें यह गिनती/आकार विकल्प संवाद बॉक्स खोलता है वहां, क्षेत्र सीमा २८,००० से १२०,००० वर्ग माइक्रोन के लिए सेटऔर परिधि सीमा ६०० से २,५०० माइक्रोन के लिए निर्धारित करें । असामान्य आकार के कीड़े का उपयोग करते समय इन मापदंडों में समायोजन करें

अब ट्रैकिंग डायलॉग बॉक्स में जारी रखकर ट्रैकिंग प्रोसेस को पूरा करें। डबल चेक करें कि आउटपुट फिल्म के फुटेज के साथ ट्रैक करता है। सुनिश्चित करें कि हर कीड़ा का प्रतिनिधित्व तब तक किया जाता है जब तक कि इसे फ़िल्टर करने का स्पष्ट कारण हो। फिर, गैर-वर्म ऑब्जेक्ट्स द्वारा उत्पादित पटरियों को मैन्युअल रूप से हटाएं।

इसके बाद, प्रत्येक फ्रेम या प्रत्येक सेकंड के बीच यात्रा की गई दूरी को औसत करके प्रत्येक कीड़ा के वेग की गणना करें, और प्रत्येक आबादी में पटरियों के लिए एक औसत वेग बनाएं प्रयोग के सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए एक नमूना बिंदु होने के लिए इस अंतिम औसत पर विचार करें

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